【摘 要】
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目的:分析细粒棘球蚴感染过程中宿主限制性因子IFITM3和Foxp3及其相关蛋白的表达差异和相关性。方法:利用STRING作出IFITM3和Foxp3及其关联的52个基因互作网络图,DAVID数据库对IFITM3和Foxp3及其相关联的52种蛋白质进行GO和KEGG富集分析。小鼠细粒棘球蚴病造模后收集肝脏组织,通过HE染色、免疫组织化学方法检测肝脏组织中IFITM3和Foxp3的表达状况。采用蛋白
【基金项目】
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省部共建中亚高发病因与防治国家重点实验室开放课题,项目编号:SKL-HIDCA-2019-10；
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目的:分析细粒棘球蚴感染过程中宿主限制性因子IFITM3和Foxp3及其相关蛋白的表达差异和相关性。方法:利用STRING作出IFITM3和Foxp3及其关联的52个基因互作网络图,DAVID数据库对IFITM3和Foxp3及其相关联的52种蛋白质进行GO和KEGG富集分析。小鼠细粒棘球蚴病造模后收集肝脏组织,通过HE染色、免疫组织化学方法检测肝脏组织中IFITM3和Foxp3的表达状况。采用蛋白印迹（Western blotting,WB）和荧光定量PCR（Real-time PCR）测定未加囊液浓度（阴性组）、1:10、1:100和1:1000共四组不同囊液浓度比例干预HEK293T和HepG2两种细胞后IFITM3和Foxp3及相关因子蛋白表达量和mRNA相对表达量;测定0H（阴性组）、12H、24H、36H、48H、60H和72H共7组不同时间点用同一囊液浓度干预HEK293T和HepG2两种细胞后IFITM3和Foxp3及相关因子蛋白表达量和mRNA相对表达量;检测人囊型包虫病和肝血管瘤疾病之间IFITM3和Foxp3及相关因子蛋白表达量和mRNA相对表达量。采用激光共聚焦的方法检测小鼠感染不同时间段后IFITM3和Foxp3在组织内的定位,及用细胞荧光的方法检测在4种不同囊液浓度下IFITM3的表达量及在Hela细胞内的定位。用Spearman进行IFITM3和Foxp3及相关因子的相关性分析。结果:（1）生信分析得到IFITM3和Foxp3相关联的52个基因的蛋白相互作用网络图。基因富集分析数据显示与寄生虫病相关的细胞学功能主要有:GO:0060337（Ⅰ型干扰素信号通路）,GO:0006955（免疫反应）,GO:0035456（对β干扰素的反应）,GO:0060333（γ干扰素介导的信号通路）,GO:0035455（对α干扰素的反应）,GO:0032020（ISG15-蛋白质结合）,GO:0034341（对γ干扰素的反应）,GO:0032480（Ⅰ型干扰素生产的负调控）。（2）HE染色后,可见CE肝脏组织的病灶;免疫组化结果显示随着细粒棘球蚴感染时间的延长,IFITM3在肝脏的表达量逐渐降低,Foxp3的表达量逐渐升高。在感染第2天IFITM3的表达最高而Foxp3的表达量最低,感染300天IFITM3的表达量最低,Foxp3的表达量最高。（3）WB和PCR的结果显示,随着囊液干预浓度的降低两种细胞中IFITM1、IFITM2、IFITM3、Foxp3和ISG15蛋白表达量和mRNA的相对表达量都逐渐增高。（4）WB和PCR的结果显示,随着干预时间的延长,IFITM1、IFITM2、IFITM3、IFIT3和ISG15蛋白表达量和mRNA的相对表达量逐渐降低,Foxp3的表达量是逐渐增高的。（5）WB和PCR的结果显示,在囊型包虫病患者肝脏组织中IFITM1、IFITM3、Foxp3、ISG15蛋白表达量和mRNA的相对表达量高于肝血管瘤患者肝脏组织中的表达量,而IFITM2和IFIT3的表达量与它们相反。（6）激光共聚焦的结果显示,在感染后期图片中发现少量黄色光主要集中在细胞质中,说明IFITM3和Foxp3发生了共定位。（7）免疫荧光的结果显示,IFITM3在未用囊液干预时主要在细胞膜上表达,随着干预浓度的降低,定位发生改变。（8）Spearman相关分析结果显示,不同浓度囊液浓度干预后,IFITM3与Foxp3在mRNA相对表达和蛋白表达成正相关;相同囊液浓度干预不同时间后IFITM3与Foxp3在mRNA相对表达和蛋白表达成负相关。结论:宿主限制性因子IFITM3通过与核转录因子Foxp3存在关联,从而与获得性免疫发生联系。
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