本文以人与鼠的肿瘤内皮标记物8（TEM8）SV3蛋白质中存在96%氨基酸同源性为依据,应用前期鼠肿瘤内皮标记物8（TEM8）SV3重组蛋白质的有关数据,针对人肿瘤内皮标记物8（TEM8）SV3重组蛋白的构建,对其特点进行深入研究,进而为后续外源人体肿瘤内皮标记物8（TEM8）抗原免疫小鼠做好前期准备。在本研究中,我们以已知人乳腺癌细胞系肿瘤内皮标记物8（TEM8）SV3 DNA为模板、设计引物并进行PCR扩增从而得到所需的DNA。应用GATEWAY克隆技术,构建克隆载体对其进行两步克隆:LR反应——进入克隆与BP反应——表达克隆,得到我们所需要的重组DNA。在表达克隆过程中,我们应用了两种不同的感受态细胞Ecoli.DH5α和BL21 StarTM（DE3）,对在不同的感受态细胞中的表达结果进行分析、优化表达条件,然后将所得到的重组DNA结果进行测序、筛选,选择同源性较高序列的DNA,进行蛋白质的诱导表达。在蛋白质的诱导表达过程中,我们同样进行诱导时间（3小时与5小时）、诱导试剂（NaCl与IPTG）及表达感受态细胞(Ecoli.DH5α和BL21StarTM（DE3）)等诱导因素的筛选,然后将诱导效果较好的重组蛋白表达产物进行蛋白质的提取,最后我们将诱导产物进行了初步纯化,并应用商用抗TEM8抗体做了Western杂交,得到以下结论:1.我们首先得到了分子量为1000bp的人肿瘤内皮细胞标记物8（TEM8）SV3 DNA。2.在诱导实验中,感受态细胞在克隆过程与诱导表达过程中都起了极其重要的作用。在克隆过程中,由于感受态细胞Ecoli.DH5α不耐受T7 DNA聚合酶,同时维持其体内的构建条件,导致表达产物DNA的浓度低、RNA污染严重等。诱导表达也受到同样的干扰,使得在诱导后的重组蛋白质产物中得不到所需的表达蛋白。3.从诱导表达的筛选中得到,对人肿瘤内皮标记物8（TEM8）SV3蛋白质的初步适宜的诱导条件为:以BL21 StarTM（DE3）为感受态细胞,IPTG为诱导试剂,诱导3小时。4.最后,我们从菌体的包涵体溶胞产物中得到未诱导产物中没有的蛋白质,在聚丙烯酰胺凝胶电泳的检测下确定该分子量约为43KD,这与先前分子量为38的重组鼠肿瘤内皮标记物8（TEM8）SV3蛋白质接近。初步纯化和Western杂交结果表明我们的重组蛋白具有重组人肿瘤标记物8（TEM8）SV3异型体的抗原特异性。