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目的:研究NF-κB的异常活化在K562/AO<,2>细胞耐药机制中的作用,为逆转白血病耐药性提供新靶点。
方法:采用MTT比色法分别检测K562/AO<,2>细胞的耐药性,吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对K562/AO<,2>细胞增殖的影响以及非细胞毒剂量PDTC、维拉帕米(Ver)预作用后对K562/AO<,2>细胞药物敏感性的影响;采用免疫细胞化学法检测K562、K562/AO<,2>细胞NF-κB表达以及不同浓度PDTC作用一定时间对其表达的抑制作用;分别采用RT-PCR、流式细胞术检测K562、K562/AO<,2>细胞mdr-1mRNA、P-gP相对表达水平以及不同浓度PDTC作用一定时间对其表达的影响。
结果:①阿霉素(ADM)对K562/AO<,2>细胞、K562细胞的半数抑制浓度(IC<,50>)分别为(33.72±1.72)和(0.57±0.07),两者相比差异有统计学意义(P<0.01),K562/AO<,2>细胞对ADM的耐药性是K562细胞的59倍;(0.6-160)umol/L PDTC呈浓度依赖性抑制K562/AO<,2>细胞增殖;非细胞毒剂量PDTC预作用后,ADM对K562/AO<,2>细胞的IC<,50>显著降低,相对逆转耐药效率为93.03%,强于经典耐药逆转剂Ver的作用81.07%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01):②K562/AO<,2>细胞NF-κB表达水平高于K562细胞,分别为(123.4±13.9)和(28.4±2.6),两者相比差异有统计学意义(P<0.01):三组非细胞毒剂量PDTC作用后,K562/AO<,2>细胞NF-κB表达均受抑制,在一定范围内呈时间和浓度依赖性;0.2 umol/L PDTC作用24h抑制效应最强,K562/AO<,2>细胞NF-κB表达降至(25.2±5.1),接近K562细胞水平(P>0.05);K562/AO<,2>和K562细胞无干预组在观察的48h内NF-κB表达无明显变化(P>0.05);③K562/AO<,2>和K562细胞mdr-1 mRNA相对表达水平分别为(0.696±0.084)和(0.019±0.006),两者相比差异有统计学意义(P<0.01);三组非细胞毒剂量PDTC作用K562/AO<,2>细胞后,其mdr-1 mRNA相对表达水平降低,在一定范围内呈时间和浓度依赖性;0.2 umol/L PDTC作用48h抑制效应最强,mdr-1 mRNA相对表达水平降至(0.268±0.050),但与K562细胞相比,差异仍有统计学意义(P<0.05);0.2 umol/LPDTC对mdr-1 mRNA表达的抑制效应强于Ver;K562/AO<,2>和K562细胞无干预组在观察的48h内mdr-1 mRNA相对表达水平无明显变化(P>0.05);④K562/AO<,2>细胞P-gp表达高于K562细胞,分别为(617.9±26.3)和(283.0±5.8),两者相比差异有统计学意义(P<0.01);三组非细胞毒剂量PDTC作用K562/AO<,2>细胞48h后,其P-gp水平降低,分别为(385.0±28.6)、(465.0±14.1)、(496.5±14.8),抑制作用呈浓度依赖性;0.2 umol/L PDTC作用48h抑制效应最强,但此时K562/AO<,2>细胞P-gp表达仍高于K562细胞,差异有统计学意义(P<0.05);0.2 umol/L PDTC对P-gp表达的抑制效应强于Ver;K562/AO<,2>和K562细胞无干预组在观察的48h内P-gp表达无明显变化(P>0.05)。
结论:抑制NF-κB异常活化可部分逆转K562/AO<,2>细胞耐药性,其机制与抑制mdr-1 mRNA及其编码的P-gP表达有关。