猪IFN-α融合PPV VP2-PCV2 ORF2基因真核表达载体构建及免疫原性研究

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干扰素(interfron,IFN)是病毒或干扰素诱生剂(Interferon inducer)进入动物机体后诱导宿主细胞产生的微量并具有广谱抗病毒和免疫调节等多种生物活性的一类细胞因子。猪α干扰素(PoIFN-α)可被用于免疫增强剂和猪病毒病的治疗。为探索PoIFN-α作为分子佐剂对核酸疫苗的免疫增强作用,本研究应用PCR技术从太湖猪肝脏基因组中扩增得到太湖猪IFN-α基因CDS区全序列,对其进行序列测定,然后将太湖猪IFN-α插入到pCI-VP2-ORF2质粒中,构建了融合表达载体PCI-IFN-α-ORF2-VP2。将该质粒转染PK15细胞后运用间接免疫荧光对PCV2的ORF2蛋白和PPVVP2蛋白进行检测。并以BALA/c小鼠为动物模型,分别运用pCI-IFN-α-ORF2-VP2、pCI-VP2-ORF2、pCI空载体、猪细小病毒灭活疫苗、猪圆环病毒亚单位疫苗通过肌注进行免疫,并于14天进行加强免疫。免疫后采集小鼠脾脏、外周血,运用MTT比色法、流式细胞术和ELISA法检测了免疫小鼠脾脏淋巴细胞的转化功能、外周血中CD4+和CD8+淋巴细胞比例以及PCV2和PPV抗体效价。结果显示:太湖猪IFN-α基因在编码区具有三处突变,其中两处错义突变导致了编码氨基酸的改变。重组质pCI-IFN-α-ORF2-VP2转染PK后48小时运用间接免疫荧光可以检测到PCV2 ORF2和PPV VP2蛋白的表达。运用该质粒免疫小鼠后能诱导小鼠产生良好的免疫应答,且重组质粒pCI-IFN-α-ORF2-VP2诱导的细胞免疫水平和PPV/PCV2抗体效价在二免后均高于或显著高于细小病毒灭活苗组、圆环疫苗组和ORF2/VP2组。这一结果表明PoIFN-α可以显著增强PCV2/PPV二联核酸疫苗的免疫效力,为进一步研制安全高效的PPV和PCV2基因工程多价疫苗提供了科学依据。
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