生地黄提取物抗氧化活性研究

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地黄[Rehmannia glutinosa(Gaertn.)Libosch.]是玄参科(scrophulariaceae)、地黄属(Rehmannia)多年生草本植物。地黄的主要药用部分是其地下部分,即块根。2005版《中国药典》规定有鲜地黄、生地黄、熟地黄三种入药。地黄中含有环烯醚萜及其苷类、酚类化合物、糖类、氨基酸类、有机酸类等多种类型化合物,有抗衰老、降血糖、抗炎症作用、提高免疫系统等多种药理作用。因此,加强地黄生物活性成分及其功能研究,为综合利用地黄资源提供可靠的理论和实验参考依据。本研究以生地黄为原料,采用70%的乙醇回流提取生地黄中抗氧化活性成分,然后依次用等体积的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,分别得到石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇提取物。并分析测定4种提取物的提取率、总酚和总环醚烯萜苷含量及对不同溶剂组分中抗氧化成分进行预试验;分别采用DPPH法、Feton法、重铬酸钾氧化法、PMS-NADH体系产生超氧阴离子还原NBT法、FRAP法和还原能力测定法(普鲁士蓝法)研究了上述4种提取物的抗氧化活性(BHT为对照)。得出如下主要结论:(1)生地黄4种溶剂提取物中含有的化合物类型无差异,但使用不同的检测方法所表现出来的结果存在差异,这可能与提取物中含有的被检测的成分含量多少有关。4种溶剂提取物中都含有酚类化合物、黄酮类化合物、萜类化合物、甾体和三萜类化合物。(2)生地黄4种溶剂提取物的提取率差异较明显,其中正丁醇提取物最高,其次为石油醚提取物,乙酸乙酯提取物最低;生地黄4种溶剂的提取物中总酚含量差异达到显著水平,其中乙酸乙酯提取物含总酚含量最高,其次为正丁醇提取物,而石油醚提取物含量最低;生地黄4种溶剂的提取物中总环烯醚萜苷含量差异较大,其中正丁醇提取物含总环烯醚萜苷含量最高,其次为氯仿提取物,而石油醚提取物中未检测到。(3)生地黄4种溶剂提取物均具有不同程度的抗氧化活性,且抗氧化活性与提取物浓度呈量效关系。但采用不同的抗氧化活性评价体系,不同溶剂提取物的抗氧化活性高低顺序有明显差异。乙酸乙酯提取物清除DPPH自由基活性、还原能力和总抗氧化活性均最高,IC(500值分别为0.178 mg/mL和0.341 mg/mL、FRAP值为1.215 mM FeSO4/g,其中乙酸乙酯提取物清除DPPH自由基的活性高于对照BHT(IC50值为0.456 mg/mL);氯仿提取物清除·OH活性最强,IC50值为1.397 mg/mL;正丁醇提取物清除DPPH自由基活性、还原能力和总抗氧化活性均较高,而清除·OH和H2O2能力较弱,其中正丁醇提取物清除DPPH自由基的活性高于对照BHT(IC50值为0.456 mg/mL);石油醚提取物在所有的检测方法中均表现出弱的抗氧化活性。由于生物抗氧化剂的作用机制非常复杂,同一物质在不同评价体系里可能表现出不同的抗氧化活性,故应采用多种方法综合评价天然植物抗氧化能力,才能得到比较科学合理的结论。(4)各种抗氧化能力测定方法之间存在一定的相关性,且与总酚含量之间也存在相关性。其中总抗氧化活性和还原能力与总酚含量之间的相关性很高,相关系数(R2)分别达到0.9928和0.7738;DPPH自由基清除率与总抗氧化活性、还原能力和总酚含量之间的相关性比较好,相关系数(R2)分别达到0.7083、0.7738和0.6419;因此,选择总抗氧化活性(FRAP法)、还原能力(普鲁士蓝法)和DPPH法作为考察生地黄提取物抗氧化活性能力的指标。
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