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研究目的:本实验通过建立慢性湿疹大鼠模型,观察湿疹清颗粒对慢性湿疹大鼠皮损程度、炎症以及免疫、HPA轴相关指标的影响,初步探讨湿疹清颗粒的相关作用机制。为湿疹清颗粒在临床上的推广和使用提供相关的理论及实验依据,为进一步深入研究本方的作用机制提供数据参考。研究方法:将60只大鼠随机分为6组,每组10只,分别为空白对照组、模型组、强的松阳性对照组、湿疹清颗粒高、中、低剂量组。除空白组外,其余各实验组用7%二硝基氯苯(DNCB)丙酮溶液涂抹于大鼠背部诱发慢性湿疹模型。造模成功后按体重连续给药7天,末次给药12h后称重,乙醚麻醉后腹主动脉取血,摘取脾脏、胸腺以及患处皮肤。腹主动脉取血,2500r/min离心20min,分离血清,冻存管分装血清,零下80℃冰箱保存。脾脏、胸腺直接分析天平称重后计算脏器指数,患处皮肤组织置于10%甲醛溶液中固定,制作病理切片。采用HE染色观察大鼠局部慢性湿疹皮损组织病理学变化;采用酶联免疫吸附法检测血清中炎症细胞因子IL-4、IL-25、IL-31、IFN-γ以及COTR、ACTH、CRH各激素含量。并对各项指标的数据进行统计,应用SPSS22.0软件进行单因素方差分析。研究结果:1、应用DNCB诱导大鼠慢性湿疹模型,使大鼠背部皮肤出现红斑、丘疹、鳞屑、苔藓化等慢性湿疹样皮损改变,造模后动物出现不停搔抓、翻滚等行为,符合实验动物学慢性湿疹造模成功表现。空白组皮损评分为0分(总分3分),模型组皮损评分分别为2.74分、2.62分、2.63分、2.62分、2.63分,与空白组相比较均具有临床统计学意义(P<0.05)。慢性湿疹大鼠模型复制成功。2、HE染色结果提示慢性湿疹模型大鼠病理改变当中可见表皮突延长,棘细胞层明显增厚,表皮中见大量炎细胞浸润,可见条状中性粒细胞浸润,皮下毛细血管增多,血管扩张等病理表现,符合慢性湿疹的皮损表现和病理改变,进一步佐证课题组的慢性湿疹大鼠模型复制成功。通过强的松、湿疹清颗粒高、中、低剂量治疗7天后强的松、湿疹清颗粒高、中、低剂量组均能有效减轻大鼠皮损红斑、浸润、鳞屑等临床症状,降低皮损评分(P<0.01),能有效抑制慢性湿疹皮损的表皮突延长、角化过度、角化不全、棘层增厚、降低或消除炎细胞浸润,抑制炎症反应等病理表现,且与慢性湿疹模型组具有显著性差异。3、免疫器官指数结果显示,慢性湿疹模型组大鼠相较于空白对照组脾脏指数、胸腺指数均明显降低(P<0.01或P<0.05);与模型组相比较,阳性对照组以及湿疹清颗粒高、中、低剂量组均不同程度的升高慢性湿疹模型降低的脾指数与胸腺指数(P<0.01或P<0.05)。与阳性组对比,湿疹清颗粒高、中剂量组大鼠脾指数升高(P<0.01),胸腺指数则无差异(P>0.05)。说明湿疹清颗粒组能明显提高慢性湿疹模型降低的脾指数与胸腺指数,改善慢性湿疹模型大鼠的免疫器官功能,且湿疹清颗粒高、中剂量组作用优于阳性对照组。4、ELISA结果显示,与空白组相比较,慢性湿疹模型大鼠血清中CRH、ACTH、CORT表达异常,含量明显降低(P<0.01);与慢性湿疹模型组相比较,湿疹清颗粒高、中、低剂量组以及阳性对照组均能明显升高慢性湿疹模型血清中过低表达的CRH、ACTH、CORT含量(P<0.01或P<0.05);各治疗组之间比较,湿疹清颗粒高剂量组大鼠血清CRH、ACTH、CORT含量均明显高于阳性对照组(P<0.01),湿疹清中剂量组大鼠血清CRH、CORT含量明显高于阳性对照组,ACTH含量则低于阳性对照组(P<0.01);湿疹清低剂量组CRH、ACTH、CORT含量明显低于阳性对照组,但均高于模型组(P<0.01或P<0.05);湿疹清高中低剂量比较,大鼠血清中CRH、ACTH、CORT含量,高剂量组高于中剂量组,中剂量组高于低剂量组,差异有统计学意义(P<0.01)。结果说明,经DNCB诱导的慢性湿疹大鼠模型血清中CRH、ACTH、CORT表达低于正常组,说明该慢性湿疹模型大鼠HPA轴功能低下,提示慢性湿疹的发病机制可能与HPA轴功能低下存在相关性。湿疹清颗粒能有效升高慢性湿疹模型血清中降低的CRH、ACTH、CORT含量,兴奋HPA轴功能,促进糖皮质激素表达,从而推测其起到抑制免疫炎症的作用。且湿疹清颗粒高、中剂量组效果优于阳性对照组。与空白组相比较,慢性湿疹模型大鼠血清中IFN-γ表达降低,而IL-4、IL-25、IL-31则表达升高(P<0.01);与模型组相比较,阳性对照组与湿疹清颗粒高、中、低剂量组大鼠血清中IFN-γ含量明显升高,而IL-4、IL-25、IL-31则表达降低(P<0.01或P<0.05);且经分析发现,湿疹清颗粒高、中剂量组总体效果要明显优于阳性对照组(P<0.05)。结果说明湿疹清颗粒高、中、低剂量组均能有效降低慢性湿疹模型所致大鼠血清中过度表达而升高的IL-4、IL-25、IL-31的含量,升高大鼠血清中IFN-γ的含量,从而调节Th1/Th2的免疫表达失衡来缓解慢性湿疹的过敏反应,减轻炎性症状、瘙痒表达,从而缓解慢性湿疹的临床症状。研究结论:1、湿疹清颗粒能有效缓解慢性湿疹大鼠模型皮损程度,降低皮损评分,减轻炎症与瘙痒程度,延缓慢性湿疹模型大鼠的发病进程,有效控制病情发展。2、湿疹清颗粒能有效升高慢性湿疹模型大鼠血清中降低的CRH、ACTH、CORT含量,其作用机制可能通过兴奋HPA轴功能,促进糖皮质激素表达,从而起到抑制湿疹炎症表达的作用。3、湿疹清颗粒能明显提高慢性湿疹模型降低的脾指数与胸腺指数,从而使慢性湿疹模型大鼠的免疫器官功能得到改善,说明湿疹清颗粒的作用机制可能与调节免疫功能有关。4、湿疹清颗粒能有效降低慢性湿疹模型大鼠血清中过度表达而升高的炎性因子IL-4、IL-25、IL-31的含量,升高大鼠血清中抗炎因子IFN-γ的含量,从而缓解炎性症状、瘙痒表达,从而减轻慢性湿疹的临床症状。其作用机制与调节Th1、Th2型细胞因子表达有关。