辨证论治的个体化用药是中医药亘古不变的观念,基因组遗传学的发展为个体化用药提供了理论支持。中药多糖作为一种能够被MHC II类分子处理和呈递的T细胞依赖性抗原,可与TCR识别并结合,参与机体免疫活动。不同个体间由于MHC B-LβII基因的高度多态性,使得MHC II类分子表位结合槽对外原性抗原表位的接纳与提呈,以及诱导T、B细胞特异性免疫具有一定的选择性,从而使不同个体对外来抗原---多糖存在免疫应答强弱的差异,进而可能影响多糖最适免疫调节剂量的筛选。目的:探究中药复方多糖(纯度为77.1%)对不同MHC B-LβII基因型蛋雏鸡的免疫调节作用,为该中药复方多糖开发成为免疫增强剂提供一定的理论基础与依据。方法:1.采用PCR-SSCP技术对500羽京红1号蛋鸡MHC B-LβII基因第3外显子进行不同基因型的筛选,并依据基因型对试验用鸡进行分组,将同种基因型鸡再分成四组,分别于8日龄肌肉注射50mg/m L(高剂量)、25 mg/mL(中剂量)、12.5 mg/mL(低剂量)的中药复方多糖及生理盐水(空白对照组),连续用药7天后,检测以下项目。2.21、35、49日龄时取鸡的胸腺、脾脏和法氏囊,计算其免疫器官指数;用动物血液分析仪检测21、27、35、42、49日龄鸡外周血血常规;28日龄时,每只试验鸡腿部肌肉注射1 mL绵羊红细胞溶液,用红细胞凝集法检测35、42、49日龄鸡血清中SRBC抗体滴度。3.采用ELISA方法检测21、27、35、42、49日龄鸡血清中IL-1β、IL-10、IL-15、G-CSF、GM-CSF的质量浓度和IBDV抗体效价;采用微量血凝抑制试验(HI)检测27、35、42、49日龄鸡血清中H5与H9亚型AI-HI抗体效价。结果:1.根据PCR-SSCP分型,共发现AA(103羽)、BB(266羽)、BC(131羽)三种基因型。经基因测序比对分析发现,AA基因型与Genbank发表的序列一致,无变异位点;BB基因型有G1722A一个变异位点,所对应编码氨基酸由Val变成Met;BC基因型有T1597A、G1722A两个变异位点,所对应编码氨基酸分别由Leu变成Gln、Val变成Met。2.与对照组相比,高剂量中药复方多糖组可显著提高AA基因型鸡法氏囊指数(P<0.05),中剂量组可显著提高AA基因型鸡胸腺指数(P<0.05),中、高剂量组可明显提高BC基因型雏鸡试验前期胸腺、脾脏和法氏囊脏器指数,同时可显著提高AA基因型鸡和BC基因型鸡的白细胞总数和淋巴细胞数(P<0.05);肌注绵羊红细胞一周后,试验组血清SRBC滴度与对照组相比,试验组比对照组高0.6-1.36个滴度。3.与对照组比较,各中药复方多糖组均可明显提高鸡血清中IL-1β、IL-15、GM-CSF的质量浓度,降低IL-10质量浓度,而G-CSF质量浓度与对照组相比差异不显著。同时,中药复方多糖对不同基因型雏鸡细胞因子含量的影响水平不同:中剂量组与其他剂量组相比,可显著提高AA基因型鸡血清中IL-1β、IL-15的质量浓度(P<0.05),同时可显著降低IL-10的质量浓度(P<0.05);高剂量组与其他剂量组相比,可明显提高BB基因型鸡血清中IL-1β、IL-15的质量浓度(P<0.05);各试验组在BC基因型鸡中无显著差异。另外,各中药复方多糖组均可显著提高27日龄、35日龄、42日龄和49日龄鸡血清中IBDV抗体效价(P<0.05),且AA基因型鸡以中剂量组提高效果最佳,BB基因型鸡以高剂量组提高效果最佳,BC基因型鸡试验组间无显著差异。与对照组相比,各中药复方多糖组对母源H5、H9亚型禽流感抗体滴度均有一定的维持效果,且在免疫H5、H9二联疫苗后,高、中剂量组可提高各基因型鸡H5、H9亚型禽流感抗体效价0.4-1.6个滴度,并对BC基因型鸡有延长较高H5和H9亚型禽流感抗体水平的趋势。结论:1.在MHC B-LβII基因第3外显子发现存在AA、BB、BC三种基因型,其中BB基因型有一个G1722A变异位点,BC基因型有T1597A、G1722A两个变异位点,且两个变异位点均引起所对应编码氨基酸发生突变,为有效突变。2.使用中药复方多糖后,不同基因型鸡免疫器官指数、白细胞数及SRBC抗体滴度表现出不同程度的提高效果,初步判断中药复方多糖对不同MHC B-LβII基因型蛋雏鸡的免疫增强效果不同,基因多态性的存在可能影响了中药复方多糖剂量的筛选。3.使用中药复方多糖后,不同基因型鸡血清中IL-1β、IL-15的含量及IBDV与H5、H9亚型禽流感疫苗的抗体效价显著提高,IL-10质量浓度显著降低,且中药复方多糖对不同基因型鸡血清中相关细胞因子含量及疫苗抗体效价的调节的最有效剂量不同,再次表明基因多态性的存在可能影响中药复方多糖剂量的筛选。