【摘 要】
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近年来,动物细胞培养技术发展迅速,部分疫苗生产行业开始使用动物细胞来生产病毒疫苗。相比之前的病毒疫苗生产方式,使用动物细胞生产病毒疫苗有许多优点,可以通过监测细胞传代期间的生长状态,来排除过敏因素与致癌因素对病毒疫苗生产的影响;可以挑选对病毒比较敏感的细胞株,来增大病毒在细胞中复制的数量,增加病毒疫苗的产量。但在疫苗生产过程中,每一批次生产都需要大量的培养基用于培养新的细胞,使得疫苗的生产成本很高
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近年来,动物细胞培养技术发展迅速,部分疫苗生产行业开始使用动物细胞来生产病毒疫苗。相比之前的病毒疫苗生产方式,使用动物细胞生产病毒疫苗有许多优点,可以通过监测细胞传代期间的生长状态,来排除过敏因素与致癌因素对病毒疫苗生产的影响;可以挑选对病毒比较敏感的细胞株,来增大病毒在细胞中复制的数量,增加病毒疫苗的产量。但在疫苗生产过程中,每一批次生产都需要大量的培养基用于培养新的细胞,使得疫苗的生产成本很高。本论文深入研究了使用低温常压等离子体（Cold atmospheric plasma,CAP）处理过的培养基对细胞内病毒复制的影响。主要研究成果如下:（1）使用CAP处理过的培养基来培养细胞能够使被感染的细胞产生更多的病毒复制数。使用TCID50和RT-PCR检测到处理后的病毒滴度最高为10-5.5TCID50·0.1m L-1,是对照的10倍以上。结果表明,CAP与病毒感染在G2/M期阻滞细胞,降低细胞膜电位,增加细胞内钙水平,并诱导选择性自噬,同时抑制病毒触发的免疫原信号。（2）基于发生了细胞自噬,使用免疫荧光的方法发现自噬蛋白与线粒体发生共定位,对线粒体分裂和融合蛋白进行检测,发生了线粒体自噬,同时表皮生长因子受体（Epithelial Growth Factor Receptor,EGFR）的1068位点磷酸化程度上升,对该位点进行点突变后,病毒滴度降低,线粒体自噬减少。（3）对CAP各组分在增加病毒滴度的作用进行探究,用不同的清除剂对CAP各组分进行清除。结果表明,去除H2O2可以提高病毒产量。探究H2O2降低病毒滴度的机制,发现H2O2使得细胞内活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）水平提高,细胞向G0/G1期阻滞,使得病毒在细胞内复制减少。（4）对MDBK细胞施加IBRV感染、IBRV感染同时CAP暴露、IBRV感染同时去除H2O2的CAP暴露处理后进行转录组测序和生物信息学分析,筛选CAP和CAP-H2O2影响细胞内病毒复制的关键基因,对这关键基因进行GO富集分析、KEGG通路分析,发现这些基因集中在细胞外空间,EGFR酪氨酸激酶抑制剂抗性,溶酶体相关通路中,这些功能与通路均与细胞周期相关。
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