【摘 要】
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本论文基于表面增强拉曼光谱(SERS)、荧光光谱,结合等温循环放大反应,如DNA链取代反应(SDR)、催化发夹组装(CHA)等,实现了对DNA甲基化酶及microRNA(miRNA)的检测。本论文主要
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本论文基于表面增强拉曼光谱(SERS)、荧光光谱,结合等温循环放大反应,如DNA链取代反应(SDR)、催化发夹组装(CHA)等,实现了对DNA甲基化酶及microRNA(miRNA)的检测。本论文主要从以下两个方面进行阐述:我们开发了一种新型、灵敏的表面增强拉曼光谱(SERS)方法用于DNA甲基化酶(Dam MTase)活性的检测,并通过目标物诱导多重循环放大的方法来筛选甲基化酶抑制剂。该方法是以DNA链取代反应为基础,并具有高效性,灵敏性,非放射性等优点。在实验中,我们使用甲基化双链底物、两个发夹模板以及拉曼探针等实现了对拉曼信号的多重放大。在此过程中,双链底物DNA一旦被Dam MTase甲基化,便可被Dpn I内切酶识别并切割,释放出两个引物来引发多重信号放大反应。因此,在室温条件下我们获得了较宽的线性范围和极高的灵敏度,其检测限为2.57×10-4 U mL-1。同时,该方法显示出优异的选择性,并成功应用于筛选甲基化酶的抑制剂。此外,这种新型的传感系统有较大的应用前景,通过改变DNA MTase的底物,我们可以对其他的目标物进行分析和检测。miRNA生物标志物对于癌症诊断和治疗展现了巨大的潜力。快速而又灵敏的检测miRNA成为当今研究的热点。我们设计了一种以发夹DNA为模板的银纳米簇结合催化发夹组装(CHA)来检测mi RNA的方法。这个平台是以富含鸟嘌呤(G)的DNA序列对银纳米簇的荧光信号具有增强作用建立的。研究中,DNA-Ag NCs的荧光信号强度与miRNA的浓度在一定的范围内呈线性关系。据此,我们可以得到miRNA的检测限为1 nM。此外,该方法具有较高的选择性,并且在生物传感器和生物技术领域也有着较好的应用前景。
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