人心肌肌钙蛋白Ⅰ(human cardiac troponin，cTnⅠ)是检测心肌损伤的重要标志物，因其高度的心肌特异性、敏感性，及较长的诊断窗口期已经广泛的应用于心肌损伤临床诊断、疗效观察和风险分层等方面.国际临床化学联盟(IFCC)的心肌标志物标准化委员会(CSCM)、美国临床生化学会(NACB)、欧洲心脏病学会以及中华医学会临床检验学分会等组织最近建议在临床工作中将心肌肌钙蛋白Ⅰ作为急性心肌梗死诊断的“金标准”.目前临床使用的检测cTnⅠ的试剂盒，由于抗体针对抗原表位和抗原结合力不同，cTnⅠ片段具有不同的清除率和降解速度，以及使用了不同的标准品，使检测结果存在很大差异，据研究报道，不同方法之间检测的差异可达100倍.cTnⅠ检测的标准化问题有待解决.　　本研究在构建的cTnⅠ稳定片段基因基础上，转化BL21(DE3)感受态细胞，超声破碎诱导表达的工程菌获取cTnⅠ包涵体，经1％TritonⅩ-100，2M脲洗涤后溶解在8M脲中，后经CM-FF柱上复性和稀释复性纯化cTnⅠ，通过对比得率，确立高效获取稳定的cTnⅠ的纯化工艺.并且研究了在4℃，-20℃，-80℃及冻干条件下蛋白稳定性.0.1g湿重包涵体经CM-FF柱上复性和稀释复性分别可获取蛋白2mg，1.4mg.柱上复性纯化周期短，效率高.cTnⅠ可在4℃稳定一周以上.-20℃，-80℃及冻干条件下可以稳定至少两个月，　　随后在稳定的cTnⅠ基础上，免疫新西兰大白兔以制备抗cTnⅠ多克隆抗体；免疫Balb/c小鼠，通过杂交瘤技术制备了高亲和力、高特异性抗人cTnⅠ单克隆抗体.随后采用间接ELISA法测定抗血清效价，用protein G亲和层析法纯化抗体，间接ELISA法鉴定抗体亲和力，Western blotting鉴定抗cTnⅠ单克隆抗体的特异性，竞争ELISA法分析抗原结合位点.最终筛选出26株稳定分泌抗cTnⅠ的单抗杂交瘤细胞株，其中两株分泌的抗体纯度高，与CK-MB、cTnT无交叉反应，效价均为:1∶1024000，亲和力分别为4.21×108mol/L、1.07×108mol/L，抗原结合位点不同.　　最后通过包被病人血清，本室cTnⅠ蛋白，筛选出能同时与之结合的抗人cTnⅠ单克隆抗体.选取其中6株采用过碘酸钠法标记，进行双抗体夹心法配对.对配对成功的抗体建立酶联免疫分析方法，进行预实验初步探讨.尝试单克隆抗体间或与多克隆抗体配对建立cTnⅠ免疫定量分析的可行性.　　综上所述，本研究确立了获取稳定的cTnⅠ蛋白的工艺，促进了cTnⅠ诊断标准化的研究.并制备了多株高亲和力的单克隆抗体和高效价多克隆抗体，并筛选出3种抗体配对组合检测病人cTnⅠ.为建立双抗体夹心的方法检测cTnⅠ提供了配对抗体原料，为进一步建立酶联免疫吸附法等其他方法检测病人血液中cTnⅠ，开发具有自主知识产权、国产化的cTnⅠ诊断试剂盒奠定基础.