论文部分内容阅读
目的:甲状腺癌作为女性内分泌系统第二高发的恶性肿瘤,其发病率逐年增高。甲状腺未分化癌(anaplastic thyroid carcinoma, ATC),作为甲状腺癌几种病理类型中恶性程度最高的一种,尽管近年来随着肿瘤治疗领域的不断发展,但是在过去的50年以来,ATC的中位生存率并没有得到提高。因此,寻找创新并且有效的治疗方法或药物显得尤为迫切。白藜芦醇(Resveratrol,RSV),来源于葡萄等植物中的一个天然化合物,被报道在抗炎症,抗衰老,抗氧化,抗肿瘤等领域起作用,但关于其在甲状腺未分化癌的作用尚不明确。因此在我们的研究中,我们考察了白藜芦醇对于甲状腺未分化癌的增殖的影响,并进一步考察了白藜芦醇对甲状腺未分化癌再分化标志物TTF2,PAX8的表达的影响,并研究了可能的机制。 研究方法:在我们的研究中,我们利用甲状腺未分化癌细胞FRO,考察了白藜芦醇对其增殖作用的影响,通过流式分析白藜芦醇对其细胞周期和细胞凋亡的影响,并考察了其对相关蛋白的表达量变化。另一方面,我们考察了白藜芦醇对甲状腺未分化癌再分化标志物TTF2,PAX8的表达的影响,并研究了可能的机制。 结果:1.白藜芦醇对FRO的抑制作用呈剂量-时间依赖性,且RSV对FRO细胞的IC50为79.96μmol/L。接着,我们考察了白藜芦醇抑制FRO的可能机制。白藜芦醇处理48小时后,降低了蛋白PCNA和CyclinD1的蛋白表达量。另外,我们同时通过流式被检测了RSV(0-120μmol/L)处理24h后细胞周期的变化情况,结果显示细胞周期S期的积聚,G0-G1和G2-M的减少,除此之外,G2/G1的比值也降低了。与对照组相比,在RSV120μmol/L处理的情况下,处于S期的细胞平均百分比由43.13%增加到70.17%。接着我们检测了发现细胞凋亡相关的蛋白cleaved-PARP,cleaved-caspase3都增高了。同时发现,抗凋亡蛋白BCL-2降低。除此之外,为了定量凋亡细胞,我们利用PI/FITC染色检测凋亡细胞发现,随着RSV剂量的增加,凋亡细胞逐渐增多。2.白藜芦醇处理后增加甲状腺癌再分化标志物TTF2,PAX8的表达。3.接下来我们发现,RSV可以抑制β-catenin的蛋白表达,于是我们继续检测Wnt/β-catenin信号通路的其他蛋白,GSK-3β,pGSK-3β,CyclinD1的表达量,发现,随着RSV浓度的增加,GSK-3β蛋白表达量增加,pGSK-3β,CyclinD1的蛋白表达量降低。除此之外,利用免疫荧光检测发现,RSV处理后,β-catenin在细胞核的聚集降低,而在细胞质的表达有增强。4.我们检测发现,SB处理后,TTF2,PAX8的表达降低。紧接着,我们对于SB处理后ATC细胞,继续加入不同浓度梯度的RSV,发现,随着RSV浓度的逐渐提高,TTF2.PAX8的表达量又开始逐渐增多。 结论:RSV能够通过细胞周期和促进凋亡的方式抑制甲状腺未分化癌细胞的增殖。另一方面,白藜芦醇能够促进甲状腺癌再分化标志物TTF2,PAX8的表达,且已一种抑制Wnt/β-catenin信号通路的方式。我们的研究发现Wnt/β-catenin可以作为新的治疗ATC的靶点,而且诸如类似白藜芦醇之类的药物应该得到进一步研究。