马铃薯疮痂病生防链霉菌PBSH9的鉴定及其抗生作用研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hermitjin
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马铃薯疮痂病是马铃薯生产中的重要病害,目前没有有效的防治措施。生物防治是解决该病害的重要方法。菌株PBSH9是本课题组前期分离得到的马铃薯疮痂病的生防菌,田间防效高达73.97%,且能增加产量和改善品质。经形态学、生理生化、16S rDNA和多位点序列分析(MLSA),初步鉴定为链霉菌的一个新种Streptomyces sp.。本研究拟进一步和模式菌株比较,进行鉴定。同时研究菌株PBSH9对马铃薯疮痂病菌的抗生作用,分离抗生物质。1.利用Nanopore测序平台检测生防菌株PBSH9的全基因组序列,结果表明,菌株PBSH9基因组大小为7347225 bp,共获得131027个reads,平均长度11868bp,G+C含量71.65%,基因组中蛋白质编码基因、rRNA基因和tRNA基因分别为6473、18和71个。利用anti SMASH v6.0.1网络分析平台得出菌株PBSH9有31个次级代谢产物生物合成基因簇,共18种类型,预测出25种可能的活性化合物,未见有报道对病原链霉菌有抑制作用的化合物。2.菌株PBSH9鉴定结果显示,该菌株与亲缘关系最近的10个模式菌株相比,平均核苷酸一致性(ANI)和DNA-DNA杂交值(d DDH)均低于种间临界值95%和70%,MLSA进化距离均大于物种临界值0.007,菌株PBSH9被鉴定为链霉菌属的一个新种,命名为Streptomyces hohhotensis sp.nov.(登录号:JAKZEO000000000)。3.菌株PBSH9活性代谢物培养条件优化的结果显示,100 m L HBERC-17培养基接入9 m L浓度为1×10~8 CFU/m L的菌株PBSH9种子液,pH为7,28℃,恒温振荡培养5 d,代谢产物对马铃薯疮痂病菌的抑制效果最好。选择HBERC-17培养基为大量发酵培养基。4.利用硅胶柱层析、制备型高效液相色谱法从菌株PBSH9代谢产物中分离到2种对马铃薯疮痂病菌有抑制作用的化合物。5.生物学活性测定结果显示,2种化合物最低抑制浓度分别为0.977μg/m L和1.953μg/m L。在最低抑制浓度下,2种化合物对马铃薯疮痂病菌均有显著的抑制作用,化合物1的抑菌作用高于化合物2。2种化合物均能抑制马铃薯疮痂病菌生长而减轻病原菌对马铃薯组织和萝卜幼苗的危害,浓度大时对马铃薯组织和萝卜幼苗有毒害作用。6.2种化合物在中性条件下稳定,酸碱条件均会使化合物降解。在4、10、20、30和40℃下处理0.5~3 h时,2种化合物稳定。50℃处理0.5 h,各化合物稳定,随着处理时间的延长,2种化合物会降解。
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