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目的:从心肌细胞内Cl~-浓度及线粒体通透性转换孔道(mPTP)开放程度变化的角度探讨油茶皂苷(SQS)预处理对抗缺氧/复氧(H/R)损伤,诱导心肌细胞保护作用的分子机制。方法:1.利用H9c2细胞,经10μM SQS预处理24 h后,建立H/R模型模拟在体缺血/再灌注(I/R)损伤,通过荧光显微镜定性、流式细胞术定量检测mPTP开放程度的变化,探讨SQS预处理对mPTP开放程度的影响。2.利用H9c2细胞,经SQS预处理和细胞外液Cl~--free处理(作为降低H9c2细胞内Cl~-浓度的阳性对照)后,建立H/R模型,通过流式细胞术检测H9c2细胞内Cl~-浓度的变化,以及mPTP开放程度的变化,观察SQS抑制mPTP开放是否与其抑制H/R所诱导的H9c2细胞内Cl~-浓度的增加有关。3.利用H9c2细胞,在苍术苷(ATR)诱导mPTP开放的情况下,经SQS预处理或细胞外液Cl~--free处理后,建立H/R模型,通过流式细胞术检测H9c2细胞内Cl~-浓度的变化,以及mPTP开放程度的变化,进一步探讨抑制H/R所诱导的H9c2细胞内Cl~-浓度的增加是否为SQS预处理抑制mPTP开放的上游事件。4.利用H9c2细胞,在ATR诱导mPTP开放的情况下,经SQS预处理或细胞外液Cl~--free处理后,建立H/R模型,通过检测以下变化,探讨SQS预处理心肌保护作用是否与其抑制H/R损伤心肌细胞内Cl~-过载,进而抑制mPTP开放有关:(1)荧光显微镜定性、流式细胞术定量检测各组线粒体膜电位(Δψ_m)和线粒体活性氧(ROS)含量的变化;(2)根据试剂盒说明分别测定各组线粒体呼吸链复合体I–IV活性的变化;(3)分光光度法测定各组细胞培养液中LDH活性的变化;(4)应用生物发光法测定ATP含量;(5)MTT比色法分别测定各组H9c2细胞存活率的变化。结果:1.H9c2细胞,给予SQS预处理能够显著抑制H/R诱导的mPTP开放,从而保护线粒体功能,包括维持线粒体膜电位和线粒体复合体I-IV的酶活性,减少线粒体活性氧的产生,增加ATP的含量。同时SQS预处理能够抑制H/R所诱导的H9c2细胞内Cl~-浓度的增加,减少LDH释放、增加细胞存活率。2.H9c2细胞,给予细胞外液Cl~--free处理,在抑制H/R诱导的H9c2细胞内Cl~-过载的同时,也能够抑制mPTP开放,产生与SQS预处理相类似的作用。3.H9c2细胞,给予mPTP开放剂苍术苷(ATR)处理后显著减弱了SQS预处理和细胞外液Cl~--free处理所产生的抑制H/R损伤H9c2细胞内mPTP开放的作用,而对SQS预处理和细胞外液Cl~--free处理所产生的抑制H/R损伤H9c2细胞内Cl~-过载没有影响。4.H9c2细胞,给予mPTP开放剂ATR处理后,SQS预处理和细胞外液Cl~--free处理所诱导的抑制mPTP开放,维持Δψ_m,以及保护线粒体功能等保护作用均被逆转。结论:SQS预处理所产生心肌保护效应与其缓解H/R损伤的H9c2细胞内Cl~-过载,抑制mPTP开放,进而保护线粒体功能有关。