【摘 要】
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目的:肝细胞癌(肝癌)是肝脏恶性肿瘤最常见类型,新发病例和死亡病例在所有恶性肿瘤中均排在前列。虽然肝癌现在已经有一些治疗技术,但其预后普遍不佳。随着细胞分子生物学的进展,现已发现肝癌的发生、发展与一些关键RNA的异常表达有关。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)就是目前研究较多的关键RNA。在利用lncRNA基因芯片筛选并分析获得在肝癌中差异表达的候选lncRN
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目的:肝细胞癌(肝癌)是肝脏恶性肿瘤最常见类型,新发病例和死亡病例在所有恶性肿瘤中均排在前列。虽然肝癌现在已经有一些治疗技术,但其预后普遍不佳。随着细胞分子生物学的进展,现已发现肝癌的发生、发展与一些关键RNA的异常表达有关。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)就是目前研究较多的关键RNA。在利用lncRNA基因芯片筛选并分析获得在肝癌中差异表达的候选lncRNAs的基础上,我们初步选择并验证了其中表达差异明显的lncRNA-AK096649(lnc-AK096649),进一步探讨了其在肝癌中的基础作用、机制及临床意义,为日后在临床诊疗中的应用提供理论基础。方法:1.利用lncRNA基因芯片技术检测8例肝癌组织(易复发组、未复发组肝癌组织各4例)中lncRNAs的表达差异情况,利用生物信息学进行分析。2.体外功能研究:选用高表达lnc-AK096649的2-3种肝癌细胞系作为研究对象,设计并转染其特异性si RNA抑制其表达水平,随后通过CCK8实验、细胞克隆形成实验、细胞划痕实验和Transwell实验分析其对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。3.通过生物信息学和免疫印迹法探索lnc-AK096649作用的重要信号通路相关基因。4.采用逆转录PCR(RT-PCR)检测16例肝癌的癌组织样本及其对应的癌旁组织样本中lnc-AK096649的表达水平,和采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测了206例肝癌的癌组织样本及其对应的癌旁组织样本中lnc-AK096649的表达水平,并进行统计学分析。5.对lnc-AK096649的表达水平与肝癌临床病理参数的相关性进行分析,并探讨其在肝癌诊断中可能的潜在价值,接着采用Kaplan-Meier法分析其与术后生存期之间的关联,最后采用单因素和多因素Cox回归分析方法确立肝癌不良预后的预测因子。结果:1.分析发现了30个lncRNAs在易复发组肝癌的癌组织中有3倍以上的表达上调,lnc-AK096649是其中之一。2.体外敲低肝癌细胞lnc-AK096649表达,可明显降低肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。3.通过生物信息学预测得到lnc-AK096649与hsa-mi R-1292-3P可能通过竞争性内源RNA(ce RNA)机制在肝癌的进程中发挥作用。免疫印迹实验初步结果提示敲低lnc-AK096649,可上调p21、p53分子的表达。4.与相应的肝癌癌旁组织相比,lnc-AK096649在癌组织中呈高表达。其表达水平与肝癌的肿瘤大小、巴塞罗那分期(BCLC stage)、微血管侵犯、肿瘤分化、早期复发、血清甲胎蛋白(AFP)及手术后生存预后等有相关性(p<0.05)。结论:1.Lnc-AK096649在肝癌组织中高表达,其可能通过hsa-mi R-1292-3p/p21影响肝癌细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为。2.Lnc-AK096649可能是肝癌诊断和预后预测潜在的生物标志物。
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