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本文对番茄乙烯信号转导组分LeEIL1在拟南芥ein2突变体中的功能进行了分析。主要内容如下:
①将质粒pBluescript SK-LeEIL 1用BamH I酶切获得LeEIL1基因序列,利用pDH51质粒的35S CaMV启动子和终止子,构建了表达载体pBIN19-LeEIL1。
②将双元载体pBIN19-LeEIL1转入农杆菌,利用农杆菌介导的花序浸染法将LeEIL1基因转入拟南芥ein2突变体中。通过抗性筛选获得两个转化株系,即LeEIL1-ein2和LeEIL1-ein2。
③对转化株系进行southem分析,结果表明:LeEIL1在LeEIL1-ein2中的拷贝数为4;LeEILl在I,eEIL1-ein2中的拷贝数为1。
④Northem锄检测结果显示:LeEIL1-ein2和LeEIL1-ein2中LeEILl均获得表达,但其中LeEIL1-ein2中的LeEILl表达量显著高于LeEIL1-ein2。
⑤对转基因株系LeEIL1-ein2和LeEIL1-ein2进行"三重反应"测定,其表型有明显变化,转LeEIL1基因后的拟南芥era2突变体的"三重反应"有部分恢复,并且呈现轻微的组成型反应。
⑥转基因株系LeEIL1-ein2和LeEIL1-ein2的表型观察结果表明:转LeEIL1基因的株系比拟南芥era2突变体抽苔和花期提前;转基因株系LeEIL1-ein2和LeEIL1-ein2的抽苔和花期仍落后于野生型拟南芥;LeEIL1-ein2的抽苔和花期比LeEIL1-ein2有所提前。
⑦克隆了拟南芥受乙烯调控基因AtPR3,AtPR4,AtPDF1.2和.AtGST2的片段。以AtPR3,AtPR4,AtPDF1.2和AtGST2为探针进行了Nonhem分析。