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对于刚出生的哺乳动物而言,它们的免疫系统尚未发育健全,经母乳获取特异性抗体显得尤为重要。初乳中免疫球蛋白的主要成分是IgG,新生儿Fc受体(Fc receptor,FcRn)经胞转作用转运母源IgG时,需要穿越上皮细胞屏障。研究发现恒定链(Invariant chain,Ii)在FcRn分子进入细胞内吞途径中发挥作用。但猪Ii与猪FcRn分子在细胞中如何定位,Ii链能否与FcRn分子产生聚合,CLIP区在聚合中是否发挥关键作用?为了阐明这些问题,本研究克隆了猪Ii链基因和FcRn基因,并对其在细胞中的定位及相互关系进行探讨。首先,根据GenBank中登录的猪Ii基因和猪FcRn基因序列分别设计1对引物,经RT-PCR技术从猪脾脏和十二指肠组织扩增出特异性基因片段,将它们分别连接到pMD18-T载体,序列测定并分析。结果表明,克隆获得两个目的基因片段,猪Ii基因ORF框为645bp,编码215个氨基酸,猪FcRn基因ORF框为1071bp,编码357个氨基酸。本实验克隆获得的猪Ii基因和FcRn基因与GenBank中登录的猪Ii基因和FcRn基因相比较,同源性均在99.8%以上。其次,根据原核表达载体pET-32a的多克隆酶切位点序列和猪Ii基因序列设计引物,将猪Ii基因亚克隆至pET-32a载体上,通过SalⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定,筛选阳性重组质粒pET-32a-Ii。然后将该原核表达重组质粒转化大肠杆菌BL21,在37℃下经1.0mmol/L IPTG诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳表明,大肠杆菌表达了分子量为43kD的融合蛋白,以包涵体的形式存在。同时,优化了最佳诱导表达时间和诱导剂浓度。最后,我们构建了表达红色荧光蛋白(Red Fluorescent Protein,RFP)的猪Ii真核表达重组质粒和绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluores cence Protein,EGFP)的FcRn和Ii真核表达重组质粒,经过瞬时转染技术,将Ii与FcRn转入COS-7细胞,荧光显微镜检测基因的表达。进一步经免疫共沉淀技术检测二者之间的关系。结果发现,猪Ii和FcRn定位于细胞的内膜系统,猪Ii链与FcRn之间存在细胞内的共定位,在这一过程中Ii链CLIP区段发挥关键的作用。