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目的:ANXA2蛋白在细胞表面广泛表达,其在细胞的胞吞胞吐作用,细胞膜膜构架的形成、及纤溶系统的稳定等生理活动中发挥重要作用。ANXA2蛋白与S100A10形成的异四聚体,能够调节纤维蛋白溶解酶原、纤维蛋白溶解酶的生成和激活,是调控出凝血的重要因子。急性早幼粒细胞白血病（Acute Promyelocytic Leukemia,APL）以PML-RARα融合基因为主要遗传特征,临床表现为特征性的严重出血,早期死亡率高。前期研究发现,PML/RARα融合蛋白可上调ANXA2启动子,高表达的ANXA2蛋白可促进纤溶酶的生成。本研究的主要目的是探索ANXA2的配体S100A10在APL中的表达情况以及在出凝血中的作用。方法:1.检测U937-PR9细胞基础表达:通过Real time-PCR,Western blot,FCM的方法检测U937-PR9细胞中S100A10和ANXA2基因及蛋白表达水平。2.U937-PR9药物处理后功能变化:通过纤溶酶生成实验及细胞侵袭实验观察在Zn2+及ATRA处理后,U937-PR9细胞表面纤溶酶生成速率及其侵袭率的变化。3.APL患者标本同样处理后的表达变化:收集9例ATRA药物治疗不同时间的APL患者单个核细胞,通过Real time-PCR,FCM的方法检测APL患者单个核细胞中S100A10和ANXA2基因及蛋白表达水平。4.APL患者标本同样处理后的功能变化:通过纤溶酶生成实验及细胞侵袭实验,观察在ATRA处理后,APL患者单个核细胞表面纤溶酶生成率及其侵袭率的变化。5.S100A10与ANXA2两者的相互影响:构建pc DNA3.1-S100A10及pc DNA3.1-ANXA2真核表达质粒,通过电穿孔的方法转染至U937细胞,分别建立S100A10稳定转染细胞株及ANXA2稳定转染细胞株,通过Real time-PCR和Western Blot的方法验证细胞中S100A10及ANXA2的表达水平。6.启动子调控机制的初步研究:将S100A10和ANXA2启动子与p GL4载体连接;通过瞬时转染法将p SG5 Vector、p SG5-RARα和p SG5-PML/RARα共转染入COS-7细胞,并运用双荧光素酶报告基因检测系统检测其启动子活性。结果:1.U937-PR9细胞基础表达:U937-PR9细胞经Zn2+诱导后,在基因水平上,S100A10基因变化不明显,ANAX2基因表达升高,经ATRA处理后,两者的基因表达均降低;在蛋白水平上,PML/RARα、S100A10及ANAX2的蛋白表达均升高,经ATRA处理后,其蛋白表达均降低。2.U937-PR9细胞药物处理后功能变化:U937-PR9细胞经Zn2+诱导后,IRPG比非诱导时高3倍,细胞侵袭力提高27.5%。单用抗ANXA2及S100A10的抗体或两者联合应用,IRPG明显下降,同时细胞侵袭能力下降。细胞在经ATRA处理后,其IRPG及细胞侵袭能力均明显下降。3.APL患者标本同样处理后的表达变化:9例ATRA药物治疗不同时间的APL患者单个核细胞中,S100A10与ANXA2的m RNA和蛋白的表达随ATRA处理时间的延长而逐渐降低。4.APL患者标本同样处理后的功能变化:未用ATRA药物治疗的APL患者单个核细胞中,单用抗ANXA2及S100A10的抗体或两者联合应用,IRPG和细胞侵袭能力均明显下降。在使用ATRA药物治疗后,随着治疗时间的延长,其IRPG和细胞侵袭逐渐下降。5.S100A10与ANXA2两者相互影响的研究:成功建立稳定转染pc DNA3.1-S100A10和pc DNA3.1-ANXA2的U937细胞株。在U937-S100A10细胞中S100A10 m RNA和S100A10蛋白表达均增加,而ANXA2在基因与蛋白水平无明显变化;U937-ANXA2细胞中ANXA2 m RNA和ANXA2蛋白表达增加,同时S100A10蛋白表达也增加。6.启动子调控机制的初步研究:COS-7细胞瞬时转染结果分析表明PML/RARα融合蛋白对ANXA2启动子有明显的反式激活效应,对S100A10启动子未发现明显调控作用。结论:1)S100A10参与调控急性早幼粒细胞白血病早期的出血过程2)ANXA2蛋白的过表达可上调S100A10的蛋白表达3)PML/RARα融合蛋白对S100A10启动子活性可能不存在直接、明显的调控作用意义:本研究以转化医学为指导,立足于急性早幼粒细胞白血病早期出凝血障碍的机制研究,以实验室前期工作为基础,将ANXA2的配体S100A10纳入研究范围。为环境毒理学结合临床医学,深入研究导致血液恶性肿瘤发生可能的环境污染物提供全面的、针对性的理论依据。