【摘 要】
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局部免疫对鸡很多重要疾病的防控起重要作用。目前对局部免疫的效果尚缺少检测方法,严重限制了对疾病的预防和控制。SIgA是局部免疫作用的最重要的免疫球蛋白。研制抗鸡SIgA单
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局部免疫对鸡很多重要疾病的防控起重要作用。目前对局部免疫的效果尚缺少检测方法,严重限制了对疾病的预防和控制。SIgA是局部免疫作用的最重要的免疫球蛋白。研制抗鸡SIgA单克隆抗体,利用抗鸡SIgA单克隆抗体建立IgA抗体的检测方法,将对鸡病的诊断和防治发挥重要的作用。
1.SIgA的提纯:利用饱和硫酸铵法从胆汁中粗提鸡SIgA,用Sephadex-G200和DEAE52进一步纯化,SDS-PAGE电泳检测其达到了电泳纯,重链分子量约为70KD。
2.兔抗鸡SIgA多克隆抗体的制备:采用提纯的鸡SIgA免疫健康公兔2只,三次免疫后,获得兔抗SIgA多克隆抗体,EIASA方法测得效价为1:10<6>,用饱和硫酸铵法进行了提纯。
3.单抗的制备和鉴定:采用提纯的SIgA免疫Balb/c小鼠,四次免疫后用PEG2000融合,用建立的间接EIASA方法筛选,三次克隆后得到5株单抗,命名为lC4、1C5、1D5、1D6、1A1。对单抗进行了鉴定,结果表明1C4、1C5、1A1株单抗亚类为IgG2b,1D5、1D6株单抗亚类为IgG1,轻链均为κ链,染色体数均介于96-110之间。5株单抗针对Sigh的亲和常数均为10<10>左右。细胞上清中单抗ELISA效价为1:10<4>;腹水单抗ELISA效价为1:10<6>。免疫印迹分析表明,单抗分别为针对SIgA重链和轻链的特异性单抗。
4.单抗的初步应用:利用制备的单抗,初步建立了检测IgA总量的双夹心ELISA方法和检测IBDV特异性IgA的间接ELISA方法。对IBDV苗免疫后的鸡血清进行检测,结果表明IBDV苗免疫后,血清中可检测出特异性SIgA。
通过制备和初步应用抗鸡SIgA单抗将为进一步临床应用打下基础,对以粘膜免疫为主的疾病的防治有重要意义。
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