CD163/TWEAK在动脉粥样硬化形成过程中作用机制的研究

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目的:既往研究证明,CD163阳性巨噬细胞具有抗动脉粥样硬化作用,但其作用机制还不清楚,本课题将探讨CD163/TWEAK途径在小鼠动脉粥样硬化形成过程中的作用及可能机制。方法:以8~10周的APOE-/-及野生型C57/BL6小鼠为研究对象,分为以下四组(每组10只):APOE-/-+普食(APOE-/-+ND)组,APOE-/-+高脂(APOE-/-+WD)组,野生型+普食(WT+ND)组,野生型+高脂(WT+WD)组。喂养16周后,通过测定各组小鼠血脂水平、主动脉油红O染色测定的主动脉斑块面积以确定动脉粥样硬化模型成功建立;分离主动脉后提取蛋白质,免疫印迹法检测各组样本CD163、TWEAK的蛋白质表达水平,通过免疫组化明确动脉粥样硬化斑块CD163与TWEAK的表达情况及空间分布特征;细胞实验通过向M1巨噬细胞加入外源性重组鼠CD163蛋白(Rm-CD163),利用Western-blot检测TWEAK的表达,以明确CD163对TWEAK是否具有调节作用。结果:(1)与WT+ND和WT+WD小鼠相比,APOE-/-+ND和APOE-/-+WD小鼠的总胆固醇水平、甘油三酯水平及低密度脂蛋白胆固醇水平均显著增高(p<0.001),高密度脂蛋白胆固醇显著降低(p<0.001),但上述指标在APOE-/-+ND组和APOE-/-+WD组之间无显著性差异。(2)主动脉油红O染色结果显示,无论是主动脉斑块面积/主动脉面积比值还是升主动脉及主动脉弓斑块面积/主动脉弓面积在APOE-/-小鼠中均显著增加,p<0.0001。(3)Western-blot结果显示,与野生型小鼠相比,APOE-/-小鼠主动脉CD163的表达水平显著增加(P<0.05);与之相对应的是,APOE-/-小鼠其主动脉中TWEAK表达水平较野生型小鼠亦显著升高(P<0.05)。(4)免疫组化结果显示,CD163在远离脂质核心的部位阳性表达,而TWEAK可见于动脉粥样硬化斑块的所有部位。(5)分离APOE-/-小鼠腹腔巨噬细胞,利用激光共聚焦鉴定其为M1巨噬细胞(CD163阴性表达),与Western-blot检测结果一致;向M1巨噬细胞加入外源性的重组鼠CD163蛋白质(0.5ug/ml),其TEWAK蛋白质表达水平显著降低(p<0.05)结论:在动脉粥样硬化的微环境中,CD163及其配体TWEAK的蛋白质水平显著增加,CD163阳性巨噬细胞主要存在于斑块相对稳定的远离脂质核心的部位,而加入Rm-CD163的巨噬细胞TWEAK水平降低,以上的结果表明:CD163通过减抑制TWEAK的表达发挥抗动脉粥样硬化作用。
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