本试验的目的是从中国葡萄属野生种华东葡萄白河中克隆白藜芦醇合酶基因,然后构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21中表达白藜芦醇合酶,从而获得一种新型的功能性微生态制剂基因工程菌种。白藜芦醇合酶是催化合成白藜芦醇的关键酶。白藜芦醇(三羟基反式芪)存在于少数几种植物中,药理学的研究表明,它具有抗氧化、抗菌、抗炎症等重要生理活性。对该酶及其基因的研究使我们可以有效的利用白藜芦醇。本试验采用反转录PCR(RT-PCR)的方法,首先从葡萄叶片中提取总RNA,利用其中mRNA反转录为cDNA,然后利用白藜芦醇合酶基因引物,以cDNA为模板扩增出目的基因。回收纯化后再用带有酶切位点的特异引物进行扩增,引入限制性酶切位点。回收纯化目的基因,将其克隆到克隆载体pGEM-T Easy上,构建重组质粒pGEM-T-RS,转化大肠杆菌DH5α,酶切鉴定后送检测序。结果表明,目的基因的长度为1179bp,编码392个氨基酸,与Genbank中己有的几个葡萄白藜芦醇合酶基因序列相似性为96%-98%,氨基酸序列相似性为97%-99%。从重组质粒中切下目的基因,回收纯化后亚克隆到原核表达载体pET-22b(+)上,构建重组质粒pET-RS,转化大肠杆菌BL21,进行抗性筛选及酶切鉴定,表明原核表达载体构建成功。培养重组菌株,利用比浊法研究其生长曲线,发现培养4h后菌株进入对数生长期。在对数生长期用IPTG诱导重组菌,超声波破碎菌体,收集上清液。最后进行SDS-PAGE凝胶电泳分析,表明白藜芦醇合酶被成功诱导表达。本试验成功获得中国葡萄属野生种华东葡萄白河白藜芦醇合酶基因,并在大肠杆菌BL21中实现了大量表达,为下一步利用该菌株生产微生态制剂奠定了基础。