柑橘(Citrus)是一类芸香科(Rutaceae)柑橘属(Citrus L.)植物,世界第一大水果,其加工产生大量的皮渣废弃物,是回收类黄酮等活性成分的良好原料。目前,柑橘类黄酮比色定量还缺乏统一的共识,几种常用的比色测定法可能存在误用情况;另外,不同种柑橘的类黄酮组成各异,生物学活性差异较大,尚缺乏建立与氧化应激和肥胖相关的代谢综合征的防治与柑橘种类合理利用的关系的研究。因此,本文首先系统评价了 4种常用柑橘总黄酮比色测定法的适用性与缺陷,以HPLC法为标准建立了相对可靠的快速定量法,以避免方法误用。另外,以8种具有代表性的柑橘皮提取物为研究对象,从柑橘种学角度,以氧化应激和肥胖这两个与代谢综合征密切相关的风险因素为切入点,筛选出综合活性最佳的柑橘种类。最后,通过荧光猝灭、圆二色谱和分子对接等技术手段阐明了橙皮苷(橘皮提取物中最主要的胰脂肪酶抑制活性成分)与胰脂肪酶的相互作用机制。主要结论如下:1、4种常用的比色测定法均有其自身的适用性与缺陷,改进的Davis法用于柑橘类黄酮测定较为可靠。亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠法适用于测定B环上含邻二酚羟基且C环上无C-3羟基的类黄酮,缺陷在于无专属性;氯化铝法适用于测定黄酮醇和含C-5羟基的黄酮,缺陷在于含量测定不充分。这两种方法原理上的不适用性造成测定结果不准确。2,4-二硝基苯肼法适用于测定黄烷酮和多甲氧基黄酮,缺陷在于受样品中其它含羰基物质的干扰;改进的Davis法以柚皮苷为标品、420nm为波长测定胡柚和蜜柚,以橙皮苷为标品、360nm为波长测定其余种柑橘,弥补了原有Davis法的缺陷,测定结果与HPLC法相一致,是一种快速、简便且可靠的柑橘类黄酮定量法。2、8种代表性橘皮提取物中碰柑提取物总酚含量最高、综合抗氧化能力最强。经D-101大孔树脂纯化后,8种橘皮提取物的黄酮纯度可提高3-9倍,主要包括橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷、芸香柚皮苷和圣草次苷等5种黄烷酮,不同样品间组成差异较大,其中胡柚皮提取物总黄酮含量最高,碰柑提取物总酚含量最高。4种化学抗氧化方法测定结果表明,碰柑提取物综合抗氧化能力最强。细胞抗氧化实验结果表明,橙皮素可在细胞内环境下发挥抗氧化作用,一定程度上反映了碰柑提取物的体内抗氧化潜力。3、首次阐明了橙皮苷作为橘皮提取物中主要胰脂肪酶抑制活性成分与胰脂肪酶的相互作用机制。胰脂肪酶的活性与肥胖的形成密切相关,8种橘皮提取物均可有效抑制胰脂肪酶活性,其中甜橙皮提取物抑制作用最强,属于非竞争性抑制。橙皮苷是主要活性成分,可有效地静态猝灭胰脂肪酶的内源荧光,其C-7上的糖苷基团发挥了重要作用。此外,橙皮苷主要通过氢键和范德华力与胰脂肪酶在非催化位点处发生相互作用,结合过程属于自发进行的放热反应,并且不会改变胰脂肪酶的二级结构。分子对接模拟结果表明,橙皮苷在胰脂肪酶的非催化区可与Thr221、Arg191、Ser195和His224等氨基酸残基形成氢键,与实验结论相一致。