硝基苯降解菌Pseudomonas sp. XY-1的分离、鉴定及其降解特性的研究

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从长期受硝基苯污染的土壤中分离筛选获得一株硝基苯降解细菌,经形态、生理生化特性测定及16S rRNA基因序列系统进化分析,初步鉴定该菌属于假单胞菌属(Pseudomonas sp.),并将其命名为XY-1。菌株XY-1最适生长温度为30℃,在pH值为6.0-10.0时,XY-1生长良好;当NaCl浓度介于0.5-15 g/L时菌株生长较好;在以葡萄糖、麦芽糖和蔗糖为碳源,以有机氮为氮源的培养基中生长较好。该菌株对100 mg/L的氨苄青霉素、壮观霉素、链霉素、氯霉素和红霉素均有抗性。菌株XY-1能以硝基苯为唯一碳源生长,硝基苯初始浓度为200 mg/L时,24 h降解率可达97%。该菌株降解硝基苯的最适pH值为7.0-9.0,最适温度为30℃,降解硝基苯的速率和起始接种量呈正相关;Mg2+、Ca2+、Fe2+对该菌株降解硝基苯没有显著影响,Cu2+、Cd2+有明显抑制作用;该菌株对硝基苯的最大耐受浓度为800 mg/L,此外,该菌还能降解对氯硝基苯和对氯苯胺。采用PCR方法从XY-1中扩增到硝基还原酶基因nbzA全长序列,通过比对发现该基因与已报道的nbzA序列相似性为99%。XY-1带有两个大质粒,经质粒消除后获得一株突变株,该突变株只含一个质粒,对氨苄青霉素、壮观霉素、氯霉素、红霉素、链霉素、四环素和卡那霉素与菌株XY-1表现出相同的抗性结果,并且不能降解硝基苯,PCR检测该突变株发现丢失了nbzA基因,推断硝基还原酶基因nbzA定位于其中的一个质粒上。应用菌株XY-1对受硝基苯污染的土壤进行了生物修复试验。该菌株可以在苯胺浓度为60 mg/L下降解硝基苯。在土壤中降解硝基苯的最适温度为30℃,当接种量为106 CFU/g土壤,土壤的含水量为20%时,15d可使该土壤中硝基苯浓度降至1 mg/kg土壤以下。
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