【摘 要】
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研究背景和目的: 缺血预适应在体内可减轻内皮细胞损伤,在体外培养的人脐静脉内皮细胞进行缺氧复氧以模拟缺血再灌注,观察缺氧复氧对细胞的损伤,以及缺氧预适应对细胞保护作用
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研究背景和目的: 缺血预适应在体内可减轻内皮细胞损伤,在体外培养的人脐静脉内皮细胞进行缺氧复氧以模拟缺血再灌注,观察缺氧复氧对细胞的损伤,以及缺氧预适应对细胞保护作用及其可能机制。 方法: 培养的细胞共分为7组:对照组(Control组)、缺氧复氧组(HR组)、缺氧预适应组(HPC组)、缺氧复氧+自由基清除组(HR+EUK134组)、缺氧预适应组+自由基处理组(HPC+H2O2组)、自由基处理组(H2O2组)和自由基处理+自由基清除组(H202+EUK134组)。缺氧时以无糖无血清培养基和三气低氧孵育箱来模拟缺血,氧气浓度为2.5%以下;复氧时以完全培养基和常规孵育箱来模拟再灌注,氧气浓度20%。首先将HPC和HPC+H202两组进行3个lOmin的缺氧/复氧小循环以进行缺氧预适应,然后再与HR、HR+EUK134两组一起进行1小时大缺氧。复氧时,向HPC+H2O2组加入H202(100pmol/L)、HR+EUK134组加入EUK134(10fxmol/L),再在常规孵育箱复氧2小时。Control、H2O2和H202+EUK134三组不经过任何缺氧。复氧后收集各组细胞检测细胞存活率,测定超氧阴离子水平、过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性等氧化应激指标,检测细胞内还原型和氧化型谷胱甘肽浓度、eNOS谷胱甘肽化和一氧化氮水平,以及谷胱甘肽还原酶和谷氧还蛋白表达。 结果: 1.与Control组相比,HR和H202可使细胞存活减少;与HR相比,HPC和EUK134均可提髙细胞存活率; 2.与Control组相比,HR组可提高氧化应激水平,主要通过增加超氧阴离子水平和降低过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性;缺氧预适应可减轻氧化应激; 3.与Control组相比,缺氧复氧增加eNOS谷胱甘肽化,减少NO生成,而缺氧预适应可减轻eNOS谷胱甘肽化,增加NO生成; 4.与Control组相比,H202可增加氧化应激及eNOS谷胱甘肽化,EUK134后可减轻氧化应激和eNOS谷胱甘肽化; 5.与HR组相比,EUK134可减轻氧化应激,减少eNOS谷胱甘肽化,而增加一氧化氮生成; 6.与HPC组相比,H2O2进一步增加其氧化应激水平和eNOS谷胱甘肽化,而使一氧化氮生成减少,从而消除其保护作用; 7.直接缺氧复氧使谷氧还蛋白和谷胱甘肽还原酶表达降低,而缺氧预适应可提髙二者表达。 结论: 直接缺氧复氧可引起细胞氧化应激水平明显增髙,并改变谷胱甘肽相关分子水平,从而增加eNOS谷胱甘肽化,抑制其活性;而缺氧预适应可减轻氧化应激,减少eNOS谷胱甘肽化,恢复eNOS活性,增加一氧化氮生成。这可能是缺氧预适应重要的保护机制。
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