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灵芝是著名的药用真菌之一,灵芝孢子是灵芝的生殖细胞,富含多糖、三萜类、多种氨基酸等生理活性物质,具有抑制肿瘤、免疫调节等多种生理功能。灵芝孢子经破壁后,有利于有效成分的释放和使用,目前国内外常被用来制作保健品的原料。本文主要探讨,破壁灵芝孢子粉的安全性以及免疫调节作用。1 一般毒性试验1.1小鼠经口急性毒性,经口一次性灌胃最大浓度0.25g/mL,连续观察14天,动物无死亡,无中毒,无异常,饮食饮水正常,可判定是无毒。1.2 30天喂养试验,长时间喂饲不同剂量的破壁灵芝孢子粉,观察其对动物引起有害反应的剂量,经过大鼠腹主动脉采血,检测血常规,血生化,动物大体解剖,组织病理学检测,各剂量组结果与对照组比较没有统计学差异,由此可初步认为在本试验条件下长期服用破壁灵芝孢子粉对机体并无明显不良反应,基本上是安全的。2特殊毒性试验2.1鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶(Ames)试验,利用平板掺入法检测供试品的诱变性,预测其遗传危害和可能的潜在致癌作用。结果破壁灵芝孢子粉对鼠伤寒沙门氏菌的TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株,在加与不加S-9时,都没有发现破壁灵芝孢子粉有致基因突变作用。2.2小鼠骨髓细胞微核试验,采用30h给受试物法,两次给受试样品间隔24h,第二次在给受试样品6h后颈椎脱臼法处死动物,取胸骨,挤出骨髓,常规制片、封片、镜检。结果破壁灵芝孢子粉低,中,高剂量组的微核率与阴性对照组(无菌水)相比没有显著性差异(P>0.05),而阳性对照组(环磷酰胺)则显著高于阴性对照组(P<0.01)。经过观察统计分析,破壁灵芝孢子粉对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核形成及PCE/RBC比值没有产生影响,得出破壁灵芝孢子粉对小鼠骨髓细胞不具有诱发突变作用。2.3小鼠精子畸形试验,小鼠连续灌胃5天,在第一次给受试样品的第35天,颈椎脱臼法处死动物,取两侧附睾精子滤液,按常规制片、封片、镜检并记录精子形态及数目。结果低,中,高剂量组的精子畸形率与阴性对照组(无菌水)比较没有统计学差异(P>0.05),而阳性对照组(环磷酰胺)则显著高于阴性对照组(P<0.01)。所以破壁灵芝孢子粉对小鼠的精子畸形率没有明显影响。3增强免疫力功能试验小鼠根据体重大小随机分组,灌胃不同浓度(166.7mg/kg·bw/d、333mg/kg·bw/d、1000mg/kg·bw/d)的破壁灵芝孢子粉第30d后,分别测定破壁灵芝孢子粉溶液对细胞免疫、体液免疫、单核巨噬细胞吞噬功能和自然杀伤(NK)细胞活性影响,从而鉴定破壁灵芝孢子粉的免疫调节作用。1.1用MTT法进行刀豆蛋白A诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验,结果高剂量组加ConA孔与不加ConA孔光密度的差值高于对照组,所以差异有统计学意义(P<0.01)。1.2小鼠迟发型变态反应,耳肿胀法,结果二硝基氟苯诱导的迟发型变态反应检测中,低剂量组、中剂量组、高剂量组耳壳增重与对照组比较,差异没有统计学意义(P>0.05)。1.3抗体的生成细胞检测试验,结果高剂量组的溶血空斑数比对照组的高,差异有统计学意义(P<0.01)。1.4血清溶血素检测试验,结果高剂量组的小鼠血清半数溶血值比对照组高,差异有统计学意义(P<0.01)。1.5自然杀伤(NK)细胞活性的测定(乳酸脱氢酶测定法),高剂量组NK细胞活性与对照组组相比较,差异有统计学意义(P<0.01)。1.6碳廓清试验,中剂量、高剂量组吞噬指数a与对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。1.7腹腔的巨噬细胞吞噬鸡红细胞,低剂量组、中剂量组、高剂量组吞噬百分率及吞噬指数与对照组相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。综上在本试验条件下破壁灵芝孢子粉没有毒性作用且具有增强免疫力的功能。