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目的:讨论高能X射线对肺癌骨转移细胞株SPC-A-1BM ERCC1蛋白表达的影响,揭示细胞株SPC-A-1BM对于铂类药物出现耐药性的时间点及建立动物模型后ERCC1蛋白表达情况。 方法:将人肺癌骨转移细胞株SPC-A-1BM培养后,取指数生长期的细胞分为试验组和对照组。将试验组用医用直线加速器6MV X射线照射,每次2Gy,1次/天,共计10Gy。照射完成后,每隔一周取指数生长部分细胞冷冻备用,对照组也取部分细胞冷冻,最后得到5份实验标本。用4%多聚甲醛固定2h,甘油封存,零下200C保存。用免疫组织化学SABC法检测ERCC1的表达情况。用鼠抗人ERCC1单抗试剂盒,根据试剂说明操作:经3%H2O2灭活过氧化物酶;微波抗原修复;滴加血清封闭液;加入鼠抗人ERCC1单抗试剂;滴加生物素二抗;滴加试剂SABC;用DAB显色,用苏木素复染,脱水,二甲苯透明,中性树脂封片。ERCC1阳性表现为细胞核内显示棕黄或棕红色颗粒沉淀,利用高倍显微镜视野计数100个细胞中阳性细胞表达的数目,每张片子不同位置重复5次。动物模型的建立是将对照组和高能射线照射10Gy组的细胞株培养后,取指数生长期的细胞制成悬浊液,用于各10只试验裸鼠的尾静脉接种。接种完成后,在SPF环境下饲养4周后,接受解剖观察裸鼠的成瘤情况。肿瘤组织由病理科制成组织蜡块。将病理切片后,经过脱蜡、水化;双氧水灭活过氧化物酶,蒸馏水反复洗涤后,微波抗原修复,PBS洗涤3次;滴加血清封闭液,室温温育30分,去除多余液体;加入鼠抗人ERCC1单抗试剂,4度冰箱内12h,用PBS液反复洗涤等处理;滴加生物素二抗,37℃,1h;用PBS反复洗涤3次,滴加试剂SABC,37℃,1h,再次PBS反复洗涤3次,DAB显色,苏木素复染,脱水,二甲苯透明,中性树脂封片。同样在高倍显微镜视野下计数100个细胞中阳性细胞表达的数目,每张片子不同位置重复5次。计量资料用均数±标准差((-)X±s)表示,采用SPSS19.0版软件处理数据,采用X2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果:对照组和实验组照射完成后1~4周不同时间点取得样本的ERCC1蛋白表达为(22.07±6.05%),(47.13±7.32%),(69.51±8.17%),(51.37±9.10%),(31.57±5.89%)。照射后1-3周的ERCC1蛋白表达与对照组比较有显著差异(P<0.05)。对照组试验裸鼠成瘤6只,实验组成瘤3只;实验组成瘤作用明显减弱。两组的病理切片样本ERCC1蛋白表达无显著差异(P>0.05)。 结论:人肺腺癌骨转移细胞株SPC-A-1BM在接受高能射线照射后1~3周内出现ERCC1的高表达,提示对铂类药物产生耐药性;细胞株SPC-A-1BM在受到高能X射线照射后用于接种裸鼠过程中,其生成肿瘤的能力减弱。