牛初乳中免疫球蛋白G的提取和干燥工艺研究

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免疫球蛋白G是牛初乳的重要功能性成分,对其进行综合研究是乳制品行业的重要课题之一。本课题的目的在于研究从牛初乳中提取高纯度的免疫球蛋白G的方法,并且通过对真空冷冻干燥工艺的研究获得高活性的免疫球蛋白G。本课题取得的研究成果将有利于牛初乳资源的综合利用,使牛初乳资源所具备的潜在价值得到充分反映,拓宽免疫球蛋白G应用领域,产生更大的经济和社会效益。本课题研究了牛初乳总蛋白含量的测定方法、免疫球蛋白G的提取工艺和免疫球蛋白G的真空冷冻干燥工艺,为牛初乳中免疫球蛋白G的综合利用提供了理论和技术支持,得到了以下研究结果:1.通过研究确定了牛初乳总蛋白含量的测定方法。用考马斯亮兰G-250法和双波长紫外分光光度法测定牛初乳中总蛋白含量,其吸光度值在半小时内都随时间的延长而变小,但是双波长紫外分光光度法变化的程度很低,证明双波长紫外分光光度法的稳定性比考马斯亮兰G-250法好。而取同一样品进行6次平行测定,考马斯亮兰G-250法相对标准偏差为2.041%,双波长紫外分光光度法相对标准偏差为0.082%,证明双波长紫外分光光度法的精密度比考马斯亮兰G-250法好。由此可确定用双波长紫外分光光度法测定牛初乳中的总蛋白含量。2.通过研究确定了硫酸铵盐析法提取牛初乳中免疫球蛋白G的最佳工艺。用单向免疫扩散法测定免疫球蛋白G含量,相对标准偏差为0.430%,加标回收率为99.58%。硫酸铵盐析法提取牛初乳中的免疫球蛋白G最佳工艺参数为离心速度4000r/min、水浴锅温度40℃、硫酸铵浓度35%、pH值7.4,在该条件下进行验证试验,得出免疫球蛋白G纯度为62.72%,含量为28.41mg/mL。用葡聚糖凝胶G-75作为填料,层析柱规格为1.6×70cm,洗脱液为0.01mol/L、pH7.4的磷酸缓冲液PBS缓冲液,流速为0.5mL/min,上样体积为5mL,进行凝胶层析纯化后,测得免疫球蛋白G含量为8.26mg/mL,总蛋白含量为8.87 mg/mL,得出免疫球蛋白G纯度为93.12%。3.通过研究确定了真空冷冻干燥免疫球蛋白G的最佳工艺。真空冷冻干燥最佳参数为甘氨酸和蔗糖的比例为1:1按10%添加、装柱高度为8mm、预冻温度为-20℃、预冻时间为2h,此条件下对免疫球蛋白G真空冷冻干燥,免疫球蛋白G的活性保留率可达92.64%。
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