利用RAPD标记进行湖南部分地方柚资源亲缘关系分析

来源 :湖南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hayyangxiong
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柚栽培历史悠久,分布广泛,是一类重要的经济果树。但是由于其无融合生殖现象的广泛存在,导致许多同名异物或同物异名的现象比较普遍,影响柚种质资源的评价和利用。以往多从形态学、孢粉学和同工酶等方面研究柚资源的分类演化,取得了一定的成果。但还存在许多分歧,在技术手段上也存在着一定的局限性。本试验利用RAPD技术,对我省31份柚属材料进行了亲缘关系分析。主要试验结果如下: 1.用改良SDS法、高盐低pH法和CTAB法三种方法提取柚的幼嫩叶片基因组DNA,结果表明改良SDS法是较好的提取方法。且增加盐的浓度能避免提取的基因组DNA呈凝胶状,有利于去除多糖; 2.对柚RAPD-PCR条件进行了优化。1)反应体系:每一反应总体积为25ul,其中10×buffer(含Mg2+20mM)2.5ul,模板DNA(40ng/ul)0.5ul,随机引物(5uM)2ul,dNTP(10mM)0.25ul,Taq DNA聚合酶(2U/ul)0.5ul,灭菌超纯水补足25ul;2)扩增程序:93℃,预变性2min;93℃,变性1min;36℃,退火1min;72℃,延伸2min;共42个循环,最后在72℃保温10min; 3.从100条10bp随机引物中筛选出了13条多态性强、带型清晰的引物,在分析柚资源时均得到成功应用; 4.供试材料在遗传距离取0.24时,所有供试材料聚为4大类群。从指纹图谱来看,各类有其特有的特征谱带。
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