【摘 要】
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目的:观察老年性聋患者、老年性聋C57BL/6J小鼠体内中氧化应激的变化,分析患者及老年性聋小鼠体内m6A修饰水平和m6A相关功能酶表达水平的变化。在氧化应激OC1细胞模型中初步探明m6A修饰及其功能酶的作用及机制。方法:使用NBT和TBA试剂盒检测老年性聋患者和老年性聋小鼠血浆中MDA含量和SOD活性的变化。采用LC-MS/MS检测患者血细胞总RNA中m6A修饰水平的变化。通过RT-PCR方法寻
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（No.82071057）；
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目的:观察老年性聋患者、老年性聋C57BL/6J小鼠体内中氧化应激的变化,分析患者及老年性聋小鼠体内m6A修饰水平和m6A相关功能酶表达水平的变化。在氧化应激OC1细胞模型中初步探明m6A修饰及其功能酶的作用及机制。方法:使用NBT和TBA试剂盒检测老年性聋患者和老年性聋小鼠血浆中MDA含量和SOD活性的变化。采用LC-MS/MS检测患者血细胞总RNA中m6A修饰水平的变化。通过RT-PCR方法寻找对照组患者血细胞中差异性表达的m6A功能酶。通过免疫组化观察老年性聋小鼠耳蜗内m6A功能酶蛋白表达的变化。通过GO构建氧化应激OC1细胞模型,并检测m6A甲基转移酶METTL3对SIRT1蛋白表达,细胞ROS水平及凋亡的影响。使用si RNA干扰m6A识别蛋白IGF2BP3观察其对SIRT1蛋白表达的影响。通过RNA共沉淀和荧光原位杂交实验验证IGF2BP3与SIRT1mRNA的结合与寻找两者在细胞内的共定位区域。结果:老年性聋患者和小鼠血浆MDA含量增加,SOD活性下降（P＜0.05）;患者血细胞总RNA的m6A呈低表达（P＜0.05）,METTL3和IGF2BP3呈低表达（P＜0.05）。老年性聋小鼠耳蜗中METTL3和IGF2BP3表达降低（P＜0.05）。METTL3在OC1细胞中正向调控SIRT1蛋白的表达,并调节细胞的ROS水平和凋亡比例。IGF2BP3参与调控SIRT1蛋白的表达,其与SIRT1 mRNA直接结合于OC1细胞的胞质区域。结论:老年性聋患者和小鼠体内氧化应激的升高伴随着机体m6A修饰水平及功能酶的表达下降。METTL3在OC1细胞氧化应激损伤中发挥着保护性作用。OC1细胞内METTL3和IGF2BP3协同调节老年性聋进程中关键分子SIRT1 mRNA的命运。
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