论文部分内容阅读
为了提高野公牦牛的繁殖性能，填补野牦牛精子研究领域的部分空白，本文进行了以下几个方面的研究。运用电镜技术，详细描述了野牦牛精子不同状态下的超微结构，包括新鲜精液和冷冻精液中正常精子、畸形精子、获能前后精子的形态结构及变化特征；测定了野牦牛精子透明质酸酶(HYD)、顶体酶(ACE)、酸性磷酸酶(ACP)和乳酸脱氢酶(LDH)等酶活性；首次利用双向电泳(2-DE)技术对野牦牛精液的蛋白组分进行了初步分析，并建立了800多个点的野牦牛精子蛋白质图谱。研究的结果及结论如下：1．不同状态下野牦牛精子的超微结构通过电镜观测，野牦牛精子的形态结构符合牛属动物精子特征，亦分头、颈、尾三部分，全长为78.34±7.24μm；不育个体精子的超微结构异常，并多为复合型；冷冻保存后，其头部、颈部和尾部均受到不同程度的损伤，头部损伤最为明显，顶体、顶体内容物出现分布不均、丢失等现象；获能及顶体反应(AR)时精子形态结构变化呈连续性、囊泡化的特征，顶体外膜外突形成大囊泡，内膜同时膨胀，顶体外膜外突打褶形成串珠状囊泡。上述研究结果表明：精子的形态结构与功能是统一的，只有具备完整的形态结构，才有正常的受精能力。2．野牦牛精子HYD、ACE、ACP和LDH等酶活性的测定冷冻后，野牦牛精子酶活性下降，并随保存时间的延长，下降幅度增加；冷冻保存5年以上，下降幅度大于65％(P＜0.05)；该结果揭示，对冻精需抽样测定功能和品质后再用于生产。不育个体精子HYD、ACE和ACP活性极显著低于正常组(P＜0.01)，表明其精子总体酶活性低弱，不仅死精多，而且活精中弱精比重大。野牦牛精子获能前后的ACP活性无显著差异，AR后ACP活性显著高于获能前，获能以后HYD活性显著提高(P＜0.05)；结果表明，HYD参与了精子获能，ACP活性的检测可以用于评价顶体反应。3．野牦牛精液蛋白组分的2-DE实验结果野牦牛精子全蛋白制备时，使用单层Percoll(70％)高速离心法去除圆细胞和精浆效果良好，用含7mol／L尿素、2mol／L硫脲、4％CHAPS、1％DIT和0.5％IPG Buffer的裂解液裂解野牦牛精子，辅之用漩涡混合器振荡和液氮中反复冻融，裂解效果良好。野牦牛精子全蛋白2-DE，上样量为300μg，上样体积为320μl，银染检测，蛋白分离效果良好。初步建立800多个点的野牦牛精子蛋白质图谱，大量精子蛋白分布于Mw 20～60kDa、pI 5～8之间，即中高分子量碱性蛋白居多；未能建立清晰的野牦牛精浆蛋白质图谱，但从2-DE图上可以初步得出，其蛋白主要集中在Mw 10～120kDa，DI 4～9之间。