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第一部分:芹菜素对肿瘤多药耐药细胞生长的影响【目的】研究芹菜素对肿瘤多药耐药细胞增殖、周期及凋亡等影响,了解芹菜素对肿瘤多药耐药细胞的杀伤作用。【方法】选取人肺癌顺铂多药耐药A549/DDP细胞、人乳腺癌阿霉素多药耐药MCF-7/ADR细胞为实验对象,以不同浓度的芹菜素(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L)作用为实验组,以DDP、ADR等药物作用为对照组,用MTT法检测细胞生长增殖情况,PI单染色法检测细胞周期分布情况,Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡情况。【结果】浓度为5μmol/L和10μmol/L的芹菜素组对肺癌A549/DDP细胞和乳腺癌MCF-7/ADR细胞的生长抑制作用不明显,与对照组相比无统计学差异(P>0.05);浓度为20μmol/L?40μmol/L?80μmol/L的三个芹菜素组抑制A549/DDP细胞和MCF-7/ADR细胞的生长增殖作用明显,与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。芹菜素阻滞A549/DDP细胞和MCF-7/ADR细胞周期的进展,表现为S期细胞比例增加,浓度≥20μmol/L的三个芹菜素组与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。芹菜素诱导A549/DDP细胞和MCF-7/ADR细胞凋亡增加,芹菜素浓度为20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L的三组与对照组相比具有统计学差异(P<0.05)。上述芹菜素对A549/DDP细胞和MCF-7/ADR细胞的作用,在部分不同浓度的芹菜素组间相比有差异性(P<0.05)。【结论】芹菜素具有抑制A549/DDP细胞和MCF-7/ADR细胞生长增殖功能,具有阻滞A549/DDP细胞和MCF-7/ADR细胞周期功能,具有促进A549/DDP细胞和MCF-7/ADR细胞凋亡增加功能,上述作用与其作用浓度相关。第二部分:芹菜素对肿瘤多药耐药细胞药物敏感性及转运功能的影响【目的】研究芹菜素对肿瘤多药耐药细胞的化疗药物敏感性的影响,及对肿瘤多药耐药细胞的药物转运功能的影响,了解芹菜素逆转肿瘤耐药的作用。【方法】选取人肺癌顺铂多药耐药A549/DDP细胞、人乳腺癌阿霉素多药耐药MCF-7/ADR细胞为实验对象,化疗药物联合5μmol/L芹菜素或10μmol/L芹菜素的作用为实验组,单用化疗药为对照组,采用MTT法分析A549/DDP细胞和MCF-7/ADR细胞的抑制率,计算化疗药物的半数抑制浓度IC50;以不同浓度的芹菜素(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L)作用于A549/DDP细胞和MCF-7/ADR细胞为实验组,相应的化疗药物作用为对照组,进行A549/DDP细胞和MCF-7/ADR细胞的Rh-123潴留实验,检测A549/DDP细胞和MCF-7/ADR细胞的药物蓄积和外排情况。【结果】在肺癌A549/DDP细胞中,IC50(DDP组)为(14.33±0.41)μg/ml,IC50(DDP+5μmol/L芹菜素组)为(9.81±0.17)μg/ml,IC50(DDP+10μmol/L芹菜素)为(5.76±0.39)μg/ml,相应的逆转倍数分别为1.46和为2.48,其中(DDP+10μmol/L芹菜素)组与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。芹菜素在MCF-7/ADR细胞中,IC50(ADR组)为(39.83±0.29)μg/ml,IC50(ADR+5μmol/L芹菜素组)为(16.85±0.32)μg/ml,IC50(ADR+10μmol/L芹菜素组)为(12.37±0.58)μg/ml,相应的逆转倍数分别为2.36和3.22,其中(DDP+5μmol/L)和(DDP+10μmol/L)两组与对照组相比均有统计学差异(P<0.05)。Rh-123蓄积实验中,芹菜素作用下A549/DDP细胞和MCF-7/ADR细胞内Rh-123的蓄积增加,除5μmol/L芹菜素浓度外,其他芹菜素组与对照组相比均有统计学意义(P<0.05),在不同芹菜素浓度组组别间相比,部分浓度组组间相比也有统计学差异(P<0.05)。【结论】芹菜素具有逆转A549/DDP细胞和MCF-7/ADR细胞的肿瘤耐药作用,其逆转机制与增加肿瘤多药耐药细胞内药物蓄积有关。第三部分:芹菜素对肿瘤多药耐药细胞耐药蛋白和耐药基因表达的影响【目的】研究芹菜素对肿瘤多药耐药细胞相关耐药蛋白表达及耐药基因转录水平的影响,探索芹菜素逆转肿瘤耐药的分子机制。【方法】选取人肺癌A549细胞、人肺癌顺铂多药耐药A549/DDP细胞、人乳腺癌MCF-7细胞、人乳腺癌阿霉素多药耐药MCF-7/ADR细胞为实验对象,以在A549/DDP细胞和MCF-7/ADR细胞中给予不同浓度的芹菜素(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L)处理为实验组,以无芹菜素作用的A549/DDP细胞和MCF-7/ADR细胞为对照组,以非耐药细胞A549细胞和MCF-7细胞为阴性对照组,用Western Blot方法检测各肿瘤细胞内P-gp、MRP、BCRP、LRP的表达情况,用RT-PCR检测各肿瘤细胞内MDR1 m RNA、MRP m RNA、BCRP m RNA、LRP m RNA的转录水平的情况。【结果】在非耐药的A549细胞和MCF-7细胞中,各耐药蛋白和耐药基因的转录均为低水平;在A549/DDP细胞中,LRP、LRP m RNA、P-gp、MDR1 m RNA和MRP、MRP m RNA均为高表达,BCRP和BCRP m RNA为低表达;在芹菜素的作用下,A549/DDP细胞内原先高表达的P-gp和MDR1 m RNA出现下调,其他的表达无明显改变。在MCF-7/ARD细胞中,P-gp、MDR1 m RNA、MRP、MRP m RNA、BCRP和BCRP m RNA均为高表达,LRP和LRP m RNA为低表达;在芹菜素的作用下,MCF-7/ARD细胞原先高表达的P-gp和MDR1 m RNA出现下调,其他的表达无明显改变。【结论】芹菜素通过下调A549/DDP细胞和MCF-7/ADR细胞中MDR1 m RNA转录和P-gp表达,减少P-gp蛋白介导产生的药物外排,达到逆转肿瘤耐药的作用,这是其逆转肿瘤耐药的分子机制。