本文比较了三种葡萄糖测定方法在基因工程大肠杆菌高密度培养中的应用，发现在微生物培养实验中常用的3，5-二硝基水杨酸测定葡萄糖方法在本实验中与其它方法有严重偏差，可导致错误结论。采用葡萄糖氧化酶—过氧化氢酶法监测大肠杆菌高密度培养过程中葡萄糖浓度的变化，根据监测结果制定在40L发酵罐中分批补料培养策略。通过比较pH值分别在回升0.08、0.04、0.02、0.01后即加葡萄糖补料培养所得的细胞密度，确定以pH值回升0.01作为葡萄糖补料依据。按此法高密度培养基因工程大肠杆菌BL21（DE3）plysS表达超高温菌Pyrococcus furiosus的α-淀粉酶基因，补料培养过程中葡萄糖浓度小于0.6g·L^-1，补料培养12h后可获得细胞密度OD₆₀₀值为105，细胞干重（DCW）51.5g·L^-1；乙酸积累仅6.26g·L^-1；该结果为国内首次应用pH-Stat补料培养方法获得基因工程菌的高密度培养，且接近国外用同样方法获得的高密度培养水平(60.5g·L^-1DCW)。经补料培养6h后在中等细胞密度(OD₆₀₀值为65.1)时用IPTG诱导培养，诱导4 h后胞内α-淀粉酶活力达最高值972U·ml^-1，酶蛋白占胞内可溶性蛋白的5.4％。 本文在国内首次利用含稀有密码子对应的tRNA基因的大肠杆菌宿主BL21-Codon Plus（DE3）-RIL表达超高温菌基因，结果其外源基因表达率是普通BL21（DE3）plysS的2倍。 本文比较了乳糖诱导与IPTG诱导trc启动子表达超高温菌基因的表达率，结果乳糖诱导的酶活力是IPTG诱导的56％。