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目的:雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)和人类表皮生长因子受体-2(Human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)表达水平与内分泌治疗、靶向治疗密切相关,是乳腺癌患者预后的重要指标。他莫昔芬作为内分泌治疗的代表药物分别被广泛用于ER和/或PR阳性的患者,然而内分泌耐药的出现给乳腺癌患者的治疗增加了困难,且目前对与ER相关的基因知之甚少;BAG-1是一种可显著促进Bcl-2抗凋亡作用的抗凋亡基因,由Takayama等在寻找Bcl-2蛋白和活化的糖皮质激素受体的结合蛋白时发现,有研究报道BAG-1可增强ER表达,并且BAG-1影响ER阳性乳腺癌患者的预后;我们前期的研究也发现在ER阳性乳腺癌患者中BAG-1高表达,且有统计学意义,现本研究通过过表达BAG-1(Bcl-2 associated athanogene-1)基因检测ER表达变化以及人乳腺癌细胞系对内分泌药物的敏感性变化,期望发现与内分泌治疗相关的新靶点。方法:选取ER(+)的人乳腺癌细胞系T47D及ER(-)的人乳腺癌细胞系SK-BR-3,采用real-time PCR技术检测BAG-1、ER在m RNA水平的表达,用Western blotting技术检测其在蛋白水平表达;选用BAG-1上调重组质粒转染T47D细胞,48h后用Western blotting及Real-time PCR技术检测BAG-1表达变化;并用MTT分别检测BAG-1表达上调组及空质粒组乳腺癌细胞在不同他莫昔芬药物浓度下的存活率,FACS检测细胞转染空质粒、上调质粒后在他莫昔芬药物作用下的凋亡率和细胞周期变化,Western blotting及Real-time PCR技术分别检测ER在蛋白质和m RNA水平的变化,Co-IP检测BAG-1与ER之间关系。结果:1、Western blotting检测SK-BR-3及T47D乳腺癌细胞中均有BAG-1表达,且T47D细胞系中表达高于SK-BR-3细胞系;Western blotting未检测到SK-BR-3细胞系中ER表达,在T47D细胞系中检测到ER表达。Real-time PCR实验发现T47D细胞系中BAG-1及ER表达水平均高于SK-BR-3细胞系。为进一步研究BAG-1基因与ER的关系,我们选择了BAG-1、ER均有表达的T47D细胞系继续下一步试验。2、Realtime-PCR证实转染入BAG-1重组质粒的T47D细胞BAG-1表达量较空质粒转染组升高(P<0.05),Western blotting发现转染入BAG-1质粒组的T47D细胞BAG-1蛋白表达量较空质粒转染组显著升高。3、Western blotting发现转染入BAG-1重组质粒组的T47D细胞ER蛋白表达量较空质粒转染组升高,Real-time PCR实验发现,转染入BAG-1重组质粒的T47D细胞,ER在m RNA水平显著升高。4、MTT结果发现转染空质粒和BAG-1重组质粒后,ER(+)乳腺癌细胞均随4-OH TAM药物浓度增加细胞存活率降低,在相同药物浓度作用下,转染过表达质粒的乳腺癌细胞较转染空质粒的乳腺癌细胞对4-OH TAM药物敏感性增加,且在药物浓度为14μmol/ml时,差异有统计学意义(p<0.05);用14μmol/ml浓度的药物处理48小时后,流式细胞术检测细胞凋亡发现,BAG-1重组质粒组的凋亡率较转染空质粒对照组增多(7.700±1.69706%vs.5.55±0.77782%),经统计学分析差异显著(p<0.01),流式细胞术检测细胞周期发现BAG-1重组质粒组细胞阻滞于G0/G1期较转染空质粒对照组增多(69.1850±0.70004 vs.64.385±0.12021),经统计学分析差异显著(p<0.01)。5、免疫共沉淀实验未发现BAG-1蛋白与ER表达存在直接联系。结论:我们的实验发现,人为的过表达BAG-1基因可以上调乳腺癌细胞系中ER的m RNA和蛋白表达水平,提示BAG-1的表达或与乳腺癌细胞ER的表达水平相关。且升高ER(+)乳腺癌细胞中BAG-1的表达水平能增强4-OH TAM对乳腺癌细胞生长抑制,增加其凋亡比率,并将细胞阻滞于G1期,提示BAG-1可能与乳腺癌细胞对内分泌治疗药物TAM的敏感性相关。但我们的实验并未观察到BAG-1与ER有直接相互作用的证据,提示我们BAG-1与ER之间的相互关系仍需进一步研究证实,或可为解释BAG-1与乳腺癌细胞的4-OH TAM敏感性的相关性机制提供理论依据。