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百合是多年生鳞茎植物,属百合科(Liliaccae)百合属(Lilium)植物。种质资源保存为新品种选育和遗传改良提供了基因资源。病毒病害是制约百合生产的关键因素之一。病毒检测是病毒病防治、无毒苗生产和海关检验检疫的必备技术。本研究以百合试管苗为试材,旨在(1)创建百合茎尖超低温保存的新技术,为百合种质资源超低温基因库的建立提供了技术平台;(2)初步建立了百合茎尖超低温疗法脱毒技术;(3)建立百合病毒的TAS-ELISA、RT-PCR、直接微样RT-PCR(microtissue direct RT-PCR,MD RT-PCR)和免疫组织化学定位法等多种病毒检测技术。本研究主要结果如下:1.以‘西伯利亚’百合(Lilium Oriental hybrid‘Siberia’)为试材,建立了带不定芽叶片小块超低温保存技术。将百合的叶片外植体培养在不定芽诱导培养基上,培养12天后,从叶片外植体上切取至少携带一个不定芽的叶方形小块(Small leaf squares,SLS,3×4mm)。将SLSs培养在含有0.5 M蔗糖的预培养基上培养1天,用有加载溶液处理20分钟,随后在0°C条件下,将加载处理过的SLSs用PVS2溶液脱水7小时。将材料置于铝箔条上,直接投入液氮保存。液氮保存1个小时后,将材料取出,立即投入含有1.2M蔗糖的卸载液之中复温及解冻20分钟。解冻后的材料培养在再生培养基上,这种方法超低温保存后的成活率为85%,再生率为72%。2.以感染黄瓜花叶病(Cucumber mosaic virus,CMV)的L.Oriental hybrid‘Siberia’,L.Asiatic hybrids‘Elite’和L.longiflorum Oriental‘Triumphator’为试材,利用小滴玻璃化法超低温处理茎尖,三个材料的生活率分别为95%,73%和60%,再生率分别85%,72%和43%。超低温疗法对CMV的脱毒率初步检测结果分别为85%、80%和73%,上述结果待进一步确定待测定。3.以带CMV的‘西伯利亚’百合(L.Oriental hybrid‘Siberia’)为试材,建立了TAS-ELISA、RT-PCR、直接微样RT-PCR(MD RT-PCR)和免疫组织化学定位法技术。MD RT-PCR和RT-PCR的灵敏性一致。上述研究为建立百合种质资源超低温基因库搭建了技术平台,为百合无毒苗生产开辟新途径,百合病毒病检测提供了新技术。