【摘 要】
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我们从联合基因公司提供的人D-酪氨酰-tRNA脱酰酶(Human D-Tyr-tRNA Deacylase,HDTD)的cDNA序列入手,对HDTD基因序列进行了分析和补充.HDTD cDNA全长1338bp,含有一个编码209
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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我们从联合基因公司提供的人D-酪氨酰-tRNA脱酰酶(Human D-Tyr-tRNA Deacylase,HDTD)的cDNA序列入手,对HDTD基因序列进行了分析和补充.HDTD cDNA全长1338bp,含有一个编码209个氨基酸残基的开放阅读框架.序列第167-169位核苷酸为起始密码子,旁侧序列符合Kozat规律,3末端具有典型的加尾信号.此cDNA序列在GenBank中的接收号为AF332356.通过BLAST比较发现,此cDNA编码的蛋白与大肠杆菌、酵母、流感嗜血杆菌的D-Tyr-tRN脱酰酶具有显著同源性,与大肠杆菌DTD基因的一致性为39%,与酵母DTD基因的一致性为47%.进一步分析发现,它具有与大肠杆菌、酵母、流感嗜血杆菌的D-Tyr-tRNA脱酰酶相同的Tyr_Deacylase(DTD)结构域.为了进一步研究的需要,我们用原核表达的HDTD蛋白免疫家兔,制备了多克隆抗体,ELISA实验证明抗体滴度达到1:10万以上.用抗HDTD抗体对大鼠大脑皮层和海马组织行免疫组织化学分析,发现DTD蛋白在大脑皮层和海马组织中广泛表达,主要定位于神经元细胞核中,而胶质细胞中几乎没有检测到相应的信号.本论文在对联合基因公司提供的HDTD基因序列进行信息学分析和补充的基础上,从mRNA和蛋白水平对HDTD基因的表达谱进行了分析,并且发现该基因表达受到其氨基酸底物的调节,这种异常构象的氨基酸对哺乳动物基因表达调控的影响尚属首次报道.首次在体外检测了哺乳动物D-酪氨酰tRNA脱酰酶的活性,发现了HDTD蛋白对于SH-SY5Y细胞膜上谷氨酸敏感的非选择性阳离子通道的作用.在分析HDTD基因在SH-SY5Y细胞氧化损伤过程中表达下调的基础上对AD病人脑组织切片进行了免疫组化分析,为进一步研究HDTD与神经退行性疾病之间的关系奠定了基础.
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