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目的:本研究旨在探索抑制EZH2基因表达联合放射对T细胞非霍奇金淋巴瘤(T cell Non-Hodgkin lymphoma,T-NHL)的体外抗肿瘤作用,并阐述EZH2表达降低对放射诱导T-NHL细胞系Hut78与Jurkat增殖及凋亡的影响,为T-NHL的基因联合放射治疗提供新的思路和理论依据。方法:1.采用含EZH2基因序列的sh RNA慢病毒干扰载体及阴性对照(空白载体)分别感染人T细胞淋巴瘤Hut78与Jurkat细胞株。2.通过RT-q PCR和Western-blot方法测定Hut78组(Hut78、Hut78 control、Hut78 EZH2-sh RNA)及Jurkat组(Jurkat、Jurkat control、Jurkat EZH2-sh RNA)细胞中EZH2的表达情况。3.通过MTS/PMS法测定RNA干扰沉默EZH2基因对T-NHL细胞系Hut78及Jurkat增殖能力及放射敏感性的影响。4.采用EZH2小分子抑制剂UNC1999单药处理T-NHL细胞系Hut78及Jurkat,以RT-q PCR和Western-blot方法检测药物处理前后细胞中EZH2的表达情况。5.通过MTS/PMS法测定EZH2小分子抑制剂UNC1999单药及联合X线照射对Hut78及Jurkat细胞增殖及存活率的影响。6.利用流式细胞术检测EZH2小分子抑制剂UNC1999单药及联合X线照射对Hut78和Jurkat细胞凋亡的影响。7.通过罗丹明123(Rhodamine123)染色检测UNC1999联合X线照射对Hut78和Jurkat细胞线粒体膜电位的影响。8.通过Western blot检测EZH2小分子抑制剂UNC1999单药及联合X线照射对Hut78和Jurkat细胞PARP剪切、Bcl-2蛋白表达的影响。结果:1.采用含EZH2基因序列的sh RNA慢病毒干扰载体及阴性对照感染Hut78与Jurkat细胞,以RT-q PCR检测Hut78组(Hut78、Hut78 control、Hut78EZH2-sh RNA)及Jurkat组(Jurkat、Jurkat control、Jurkat EZH2-sh RNA)三种细胞EZH2在m RNA水平的表达情况。结果显示Hut78 EZH2-sh RNA及JurkatEZH2-sh RNA细胞中EZH2的表达水平分别为31.6%和46.7%,与各组空白对照细胞相比,表达水平明显降低,且具有统计学意义(P<0.05);Western-blot检测Hut78组(Hut78、Hut78 control、Hut78 EZH2-sh RNA)及Jurkat组(Jurkat、Jurkat control、Jurkat EZH2-sh RNA)细胞EZH2蛋白的表达水平,提示转染EZH2-sh RNA后细胞EZH2表达明显降低。2.MTS/PMS法检测Hut78组(Hut78、Hut78 control、Hut78 EZH2-sh RNA)及Jurkat组(Jurkat、Jurkat control、Jurkat EZH2-sh RNA)三种细胞的增殖情况,结果发现Hut78组三种细胞的吸光度值分别为0.722±0.016,0.656±0.015和0.209±0.014;Jurkat组三种细胞的吸光度值分别为0.860±0.037,0.794±0.029和0.419±0.045;与其他两组细胞相比,转染EZH2-sh RNA的细胞增殖明显受抑;联合X线照射后,EZH2-sh RNA组细胞存活率显著降低(P<0.05),提示EZH2-sh RNA可增强放射对细胞的增殖抑制作用。3.EZH2小分子抑制剂UNC1999处理Hut78及Jurkat细胞,测算IC50值,分别为:28.59和20.28μmol/L;经RT-q PCR和Western-blot方法验证,细胞EZH2表达水平降低。与放射联合应用,对细胞的增殖抑制作用增强,放射敏感性增加。4.流式细胞术测定细胞凋亡:EZH2小分子抑制剂UNC1999处理Hut78和Jurkat细胞,可促进放射诱导的细胞凋亡。5.罗丹明123染色检测细胞线粒体膜电位:EZH2小分子抑制剂UNC1999处理Hut78和Jurkat细胞,导致放射诱导的细胞线粒体膜电位降低更加明显。6.Western blot实验显示:EZH2小分子抑制剂UNC1999处理Hut78和Jurkat细胞,促进放射诱导的PARP剪切,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低。结论:采用RNA干扰或小分子抑制剂降低Hut78和Jurkat细胞中EZH2的表达,联合X线照射,可增强放射对细胞的增殖抑制作用,促进放射诱导的细胞凋亡。