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目的:观察石斛合剂对糖尿病大鼠认知功能及肠道菌群的影响,初步探索石斛合剂保护脑功能的部分机制,为基于“肠-脑轴”探讨石斛合剂防治糖尿病认知功能障碍提供前期研究基础。方法:选取28只SPF级雄性SD大鼠,适应性喂养2周随机分为正常组(8只)和造模组(20只)。正常组予普通饲料喂养,造模组予高脂高糖饲料喂养6周后予25mg/kg STZ2次,间隔72h腹腔注射复制糖尿病模型,正常组予等量柠檬酸钠缓冲液注射,5天后测空腹血糖>11.1mmol/L为糖尿病成模鼠。将成模大鼠16只,按照血糖分层随机分成模型组、石斛合剂组。正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃,石斛合剂组给予石斛合剂灌胃,治疗持续8周后行Morries水迷宫检测大鼠学习、记忆能力。取材前测空腹血糖、收集粪便检测肠道菌群16S rDNA,麻醉后取血和组织,ELISA检测血清炎症因子IL-6、TNF-α、LPS,HE染色观察海马、结肠形态,Western Blot检测海马、结肠的紧密连接蛋白Occludin、ZO-1。结果:1.糖尿病模型组大鼠检测morris水迷宫实验显示逃避潜伏期延长,目标象限停留时间缩短(P<0.05),表明学习、记忆能力下降,说明糖尿病大鼠出现认知功能障碍。石斛合剂组逃避潜伏期缩短,目标象限停留时间延长(P<0.05),说明石斛合剂可改善糖尿病大鼠的学习,记忆能力。2.糖尿病模型组大鼠血清ELISA检测显示炎症因子IL-6、TNF-α、LPS增高(P<0.05),石斛合剂组IL-6、TNF-α、LPS下降(P<0.05)。3.糖尿病模型组大鼠海马HE染色显示CA1区细胞数量减少,分布不均,排列疏松,胞核固缩,Western Blot显示海马紧密连接蛋白Occludin、ZO-1表达减少(P<0.05),石斛合剂组海马CA1区细胞数量相对较多,分布均匀,排列规整,海马紧密连接蛋白Occludin、ZO-1表达增加(P<0.05)。4.糖尿病模型组大鼠结肠HE染色显示上皮连续性破坏、杯状细胞减少、固有层出现较多淋巴细胞浸润,Western Blot显示结肠紧密连接蛋白Occludin、ZO-1表达下降(P<0.05),石斛合剂组结肠上皮细胞相对完整,肠腺排列相对规则,固有层存在少量淋巴细胞浸润,结肠紧密连接蛋白Occludin、ZO-1表达增加(P<0.05)。5.与正常组比较,模型组大鼠肠道菌群多样性下降,门水平的厚壁菌门、变形菌门,属水平的普雷沃菌属等丰度增加,门水平的拟杆菌门,属水平的乳杆菌属、双歧杆菌属丰度等减少;与模型组比较,石斛合剂组门水平的拟杆菌门,属水平的乳杆菌属、双歧杆菌属等丰度增加,门水平的厚壁菌门、变形菌门,属水平的普雷沃菌属等丰度减少。结论:1.石斛合剂可改善糖尿病大鼠的学习、记忆功能。2.石斛合剂对糖尿大鼠血脑屏障有保护作用,可能其与减少炎症因子IL-6、TNF-α、LPS,提高紧密连接蛋白Occludin、ZO-1表达有关。3.石斛合剂减少炎症因子可能与调节肠道菌群,提高结肠紧密连接蛋白Occludin、ZO-1表达而保护肠道屏障作用有关。