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目的:研究EGF、HB-EGF、TGF-α与β1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ(β1,4-GalTⅠ)在胚胎着床调控中的相互影响,完善β1,4-GalTⅠ参与胚胎着床调控的机理。
方法:将已构建好的β1,4-GalTⅠ基因过表达质粒、干扰质粒、干扰对照质粒和空载体质粒分别转染RL95-2细胞(模拟着床期子宫内膜细胞),采用RT-PCR、western-blot、免疫细胞化学染色、免疫荧光等技术分别检测各组转染细胞的β1,4-GalTⅠ表达情况及对EGF、HB-EGF、TGF-α表达的影响;另将EGF因子、EGF抗体、TGF-α因子及TGF-α抗体分别与RL95-2细胞共培养,检测各组细胞β1,4-GalTⅠ的表达情况;通过体外着床模型(以JAR细胞模拟着床前胚胎、以RL95-2细胞模拟着床期子宫内膜)观察调控β1,4-GalTⅠ、EGF、TGF-α后对胚胎着床的影响。
结果:(1)在四种β1,4-GalTⅠ基因表达调控质粒转入RL95-2细胞,60h后通过检测RL95-2细胞内绿色荧光蛋白的出现判断转染效果:β1,4-GalTⅠ基因过表达组及基因干扰组与正常培养组、空载体转染组相比表达有明显差异,判断转染效果良好。(2)RL95-2细胞经β1,4-GalTⅠ基因过表达质粒转染后,检测其β1,4-GalTⅠ基因及EGF、HB-EGF、TGF-a基因和蛋白的表达均增高,JAR细胞与RL95-2细胞的黏附率(93.7±0.2%)高于正常组(85.3±0.5%)、空载体组(81.0±0.4%)和基因干扰对照组(85.7±0.6%)(P<0.01);而RL95-2细胞经转染β1,4-GalTⅠ基因干扰质粒抑制后,EGF、HB-EGF、TGF-α基因和蛋白的表达均下降,JAR细胞与RL95-2细胞的黏附率(66.9±0.3%)也明显下降(P<0.01)。(3)RL95-2细胞经与EGF或TGF-α共培养24h后,与正常培养组相比,Galβ1,4GlcNAc合成量增加,β1,4-GalTⅠ基因和蛋白的表达增高,同时对应的JAR细胞黏附率分别为(91.3±0.5%,91.5±0.4%),明显高于正常组(84.6±0.3%)。而RL95-2细胞与EGFAb或TGF-αAb共培养24h后,Galβ1,4GlcNAc合成量显著降低,β1,4-GalTⅠ基因和蛋白的表达减少,对应的JAR细胞黏附率分别为(67.6±0.2%,61.5±0.3%),也明显低于正常组(84.6±0.3%)(P<0.01)。
结论:模拟子宫内膜的RL95-2细胞,其β1,4-GalTⅠ与EGF、HB-EGF、TGF-α表达相互影响并进一步影响胚胎着床,推测子宫内膜细胞β1,4-GalTⅠ的表达影响胚胎与子宫内膜的识别和黏附可能通过调节EGF、HB-EGF、TGF-α的表达来实现的,而EGF、HB-EGF、TGF-α促进胚胎发育及着床机制可能与子宫内膜细胞β1,4-GalTⅠ的表达有关。