黄瓜离体再生与遗传转化体系的研究

来源 :扬州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:colossus198201
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黄瓜(Cucumis sativus L.)是我国的主要蔬菜作物之一。现代生物技术应用于作物品种改良,把育种技术从宏观水平提高到微观水平,为品种改良提供了一条全新途径。运用生物技术改良新品种的基础是具备高效、稳定的离体再生和遗传转化体系。本研究以三个特异基因型黄瓜为材料,通过直接器官发生途径,研究了基因型、外植体类型、不同浓度激素对黄瓜离体再生的影响,建立了三个基因型的再生体系;对早二N的愈伤组织及其再生芽诱导的影响因素进行了研究,建立了该基因型的再生体系;构建了CsERFl基因的表达载体,研究了抗生素临界筛选浓度、抑制农杆菌的抗生素最佳浓度、侵染时间和共培养时间对黄瓜遗传转化的影响。主要研究结果如下:1.三个黄瓜基因型早二N、D8和JIN5-508的再生能力差异较大,D8的再生能力最强,平均再生率76%,每外植体再生芽数2.0个,均高于另外两个基因型;早二N的再生能力最低,平均再生率65%,每外植体再生芽数1.1个。三个基因型都适合用子叶节做外植体。早二N最佳离体再生培养基为(MS+6-BA2.0mg/L+ABA1.0mg/L+AgNO32.0mg/L); D8最佳离体再生培养基为(MS+6-BA1.5mg/L+ABA0.5mg/L+AgNO32.0mg/L); JIN5-508最佳离体再生培养基为(MS+6-BA1.5mg/L+ABA1.0mg/L+AgNO32.0mg/L)。最佳再生芽伸长培养基为(MS+6-BA0.12mg/L),生根培养基用MS培养基。2.用早二N子叶做外植体,建立了早二N的再生体系:最佳愈伤组织诱导培养基为(MS+IAA0.3mg/L+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L),最佳再生芽诱导培养基为(MS+IAA0.4mg/L+6-BA1.0mg/L),生根培养基为MS培养基。3.通过农杆菌菌株EHA105构建了CsERFl基因的表达载体;研究了早二N、D8和JIN5-508对Kan的敏感性。早二N和D8的Kan再生芽临界筛选浓度为75mg/L,JIN5-508Kan再生芽临界筛选浓度为60mg/L。三个基因型生根Kan临界筛选浓度都为60mg/L。抑制农杆菌最佳抗生素浓度为Cef500mg/L。最佳侵染时间为20min,最佳共培养时间为2.5d。
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