【摘 要】
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本文以海湾扇贝(Argopectenirradias)和中国蛤蜊(Mactrachinensis)为原料,优化最佳的多糖提取条件,对多糖进行结构和组成分析,并进一步研究多糖的体外抗氧化性指标,和巨噬细胞生成物指标,确定了两种贝类多糖的抗氧化活性和体外免疫作用。研究结果如下:1.利用单因素方法,以多糖纯度为指标,对比分析胃蛋白酶、复合蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶及碱性蛋白酶对扇贝与中国蛤蜊的酶解效
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本文以海湾扇贝(Argopectenirradias)和中国蛤蜊(Mactrachinensis)为原料,优化最佳的多糖提取条件,对多糖进行结构和组成分析,并进一步研究多糖的体外抗氧化性指标,和巨噬细胞生成物指标,确定了两种贝类多糖的抗氧化活性和体外免疫作用。研究结果如下:1.利用单因素方法,以多糖纯度为指标,对比分析胃蛋白酶、复合蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶及碱性蛋白酶对扇贝与中国蛤蜊的酶解效果,结果表明,扇贝和中国蛤蜊最适宜酶分别为木瓜蛋白酶和胃蛋白酶。采用正交法对酶解条件进一步优化,得到木瓜蛋白酶酶解扇贝的最优条件为酶解时间4 h,酶解pH6,酶解温度60℃,加酶量为2.5%,此条件下采用过膜、醇沉的方法提取扇贝多糖纯度为84.75%;胃蛋白酶酶解中国蛤蜊的最优条件为酶解时间5 h,酶解pH2,酶解温度35℃,加酶量为2%,此条件下提取的中国蛤蜊多糖纯度为13.82%。2.采用红外光谱法和差式扫描量热法对得到的扇贝多糖和中国蛤蜊多糖进行结构分析。结果表明,扇贝多糖中含有羧基、亚甲基、硫酸基和呋喃环,中国蛤蜊多糖含有羧基、亚甲基和硫酸基;利用PMP柱前衍生高效液相色谱法对两种多糖的单糖组成进行分析,结果表明,扇贝多糖由单一葡萄糖构成。中国蛤蜊多糖由甘露糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖和葡萄糖构成。3.通过分析扇贝多糖和中国蛤蜊多糖对羟自由基(-OH)与DPPH自由基的清除能力,确定两种多糖抗氧化性。结果表明,扇贝多糖清除DPPH自由基的IC50为6.591mg/mL,清除-OH自由基的IC50为1.010 mg/mL;中国蛤蜊多糖清除DPPH的IC50为8.394mg/mL,清除-OH自由基IC50为4.067mg/mL,扇贝多糖的体外抗氧化活性要显著高于中国蛤蜊多糖。4.将扇贝多糖和中国蛤蜊多糖作用于巨噬细胞,分析多糖对巨噬细胞不同指标影响,结果表明,扇贝多糖和中国蛤蜊多糖均有促进巨噬细胞产生NO、iNOS的作用,在高浓度下(100μg/ml以上)对巨噬细胞增殖起抑制作用,低浓度下(100μg/ml以下)对巨噬细胞的增殖起促进作用。
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