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目的:近年来，肺癌在世界范围内的发病率和死亡率均明显上升,已对人类健康形成极大威胁。探讨肺癌发病及进展机制，据此发现有效的治疗肺癌的靶向药物靶点以及对肺癌靶向药物疗效的评估已成为目前研究的热点和难点。Hippo通路在细胞增殖与凋亡的调节中起关键作用，已证实其在胚胎发育，组织器官形成以及自身稳态保持等方面都具有重要作用，最近研究发现Hippo通路功能异常与肿瘤的发生、发展关系密切。WWTR1（WW domain containingtranscription regulator1, WW域转录调节因子1）作为Hippo通路下游的效应分子能够与多种转录因子相互作用，发挥生物学功能。已有研究显示WWTR1是一个癌基因，并可促进乳腺癌、胃癌、结肠癌等多种恶性肿瘤的进展，但WWTR1调节肺癌增殖和凋亡分子机制仍不清楚。本论文旨在明确WWTR1在非小细胞肺癌组织中的表达与临床病理因素的关系，并进一步探讨WWTR1对肺癌细胞增殖和凋亡能力的影响及其可能的调节机制。方法:（1）选取105例非小细胞肺癌和10例正常肺组织标本，应用免疫组织化学的方法检测了WWTR1的表达情况。（2）应用统计学软件分析WWTR1表达与非小细胞肺癌临床病理因素的关系。（3）应用Western blot和Real-time PCR检测了正常支气管上皮细胞HBE和一系列肺癌细胞系（LK2、H1299、H460、H446、A549）中的WWTR1的蛋白和mRNA表达情况。（4）选取高表达WWTR1的细胞系A549和低表达WWTR1的HBE细胞，通过转染外源基因或siRNA干扰进行基因调控：在A549细胞系中转染WWTR1siRNA，下调WWTR1表达;在HBE细胞中转染WWTR1质粒，上调WWTR1表达。（5）采用MTT细胞增殖实验分别检测转染WWTR1的HBE细胞和干扰了WWTR1的A549细胞的增殖能力的变化。（6）用紫杉醇处理基因调控后的HBE和A549细胞，应用Annexin V/PI流式双染技术检测细胞凋亡能力的变化。（7）采用流式细胞周期术分别检测转染WWTR1的HBE细胞和干扰WWTR1的A549细胞的细胞周期变化。（8）使用Western blot和Real-time PCR筛选WWTR1调节肺癌细胞增殖、凋亡的作用靶点。结果：（1）免疫组化染色结果显示WWTR1主要在肺癌组织的细胞核或细胞浆中表达，也有部分肺癌组织中存在WWTR1的核浆共表达。在检测的105例非小细胞肺癌组织中，有44例呈WWTR1阳性表达，其阳性表达率为41.90%(44/105)。（2）分析WWTR1在肺癌组织中阳性表达与各种临床病理因素的关系。统计结果显示，WWTR1阳性表达与TNM分期显著相关（I期vsII+III期；25.71%vs50.00%；p=0.0174）； WWTR1阳性表达与肿瘤大小显著相关（T1+T2vs T3；36.59%vs60.87%；p=0.0370）；另外WWTR1阳性表达与淋巴结转移显著相关（N0vsN1+N2；32.65%vs50.00%; p=0.0723）。WWTR1的阳性表达与肺癌患者的年龄(p=0.7060),性别(p=0.1510),组织类型（p=0.4608），分化程度（p=0.9166)均无显著相关。（3）应用Western blot和Real-time PCR检测了支气管上皮细胞HBE和一系列肺癌细胞系（LK2、H1299、H460、H446和A549）中WWTR1的表达水平，结果发现WWTR1在肺癌细胞系中的表达水平明显高于正常的支气管上皮细胞系HBE。尤其是在A549细胞系中呈明显的高表达。（4）通过MTT细胞增殖实验检测WWTR1对细胞增殖能力的影响。在A549细胞中通过WWTR1特异性siRNA下调WWTR1后，细胞增殖水平明显下降；而在过表达WWTR1的HBE细胞系中，细胞增殖能力显著增加。（5）采用Annexin V/PI流式双染细胞术，观察WWTR1对经过紫杉醇(10nmol/L,24hours)处理的肺癌细胞的凋亡的影响。结果发现在敲除WWTR1后，A549肺癌细胞的早期凋亡水平和晚期凋亡水平明显升高，然而在WWTR1过表达的HBE细胞系中，细胞的凋亡水平明显被抑制。（6）流式细胞周期检测分析显示，在WWTR1表达下调后，G0/G1期细胞比例升高而S期细胞比例降低；相反，在WWTR1表达上调后，G0/G1期细胞比例降低而S期细胞比例升高。（7）运用Real-time PCR筛查潜在的与增殖和凋亡相关基因的表达，包括CyclinA，CyclinD1，CyclinE，CTGF，c-Myc， Bcl-2， Bcl-xl， XIAP和Bax。结果显示,敲除WWTR1降低Cyclin A和CTGF的mRNA和蛋白表达；而过表达WWTR1增加Cyclin A和CTGF的mRNA和蛋白表达。提示WWTR1对肺癌细胞增殖和凋亡的调节依赖或部分依赖于CyclinA和CTGF。另外，过表达WWTR1可减少Caspase3剪切；而干扰WWTR1可促进Caspase3剪切。结论：（（1）WWTR1在非小细胞肺癌组织中存在过表达，并且WWTR1阳性表达与肺癌TNM分期、肿瘤大小以及淋巴结转移成正相关。（2）WWTR1在肺癌细胞系中存在过表达；WWTR1促进肺癌细胞增殖。（3）WWTR1抑制紫杉醇诱导的肺癌细胞的凋亡。（4）WWTR1可促进肺癌细胞由G1期向S期转变。（5）WWTR1可能通过CyclinA, CTGF和Caspase3调节肺癌细胞增殖和凋亡。