番茄LeACBF基因的克隆及表达研究

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苯丙氨酸解氨酶(PAL)是一种诱导酶,许多环境条件以及植物激素对其活性都有不同程度的影响,它与植物抗逆有着极其密切的关系,对植物的生理意义非常重大。ACBF编码了结合在苯丙氨酸解氨酶启动子AC富集区上的一个转录因子,ACBF基因已经在拟南芥、烟草等植物中得到了克隆。 根据GenBank(中的拟南芥、烟草ACBF家族成员序列比较的结果,在该基因的保守区设计简并引物(degenerate primer),以转色期普通番茄果实的RNA为模板,进行RT-PCR扩增,获得239 bp的扩增片段,以此片段作为探针筛选转色期普通番茄果实cDNA噬菌体文库,获得了包含全长编码区的阳性克隆。序列分析表明这个基因属于ACBF家族,命名为LeACBF。LeACBF的cDNA长1503bp,编码区含有428个氨基酸。LeACBF与烟草中的ACBF基因在DNA水平上的序列相似性为83%,在氨基酸水平上的序列相似性为79%,是一个新基因。LeACBF的DNA序列已在GenBank登录,登录号为AY506544。 Northern杂交的结果分析表明:LeACBF基因在转色期番茄的根、茎、叶、果实等组织中均有表达,并且表达量无明显差异。 用不同的紫外线照射时间处理番茄幼芽,苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性呈先是增加,达到最大值后再减小的趋势。通过Northern杂交结果的分析,LeACBF基因的表达量与苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性变化具有相同的趋势。表明在紫外光照射条件下,LeACBF编码的转录因子的变化趋势与苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的变化趋势有一定的相关性。
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