目的:以3T3-L1前脂肪细胞为研究对象,重点探讨不同作用浓度Met对前脂肪细胞增殖分化的影响机制。观察前脂肪细胞阶段给予不同浓度二甲双胍后,对前脂肪细胞增殖分化的影响,同时检测成脂相关多种转录因子的变化情况。方法:购置3T3-L1前脂肪细胞进行培养,传二代后,将脂肪细胞接种到孔板,培养24小时后,不同浓度的二甲双胍0mM(control)、1mM、2mM、5mM、10mM作用48h,(1)用CCK-8检测细胞增殖情况。(2)收集细胞用RT-PCR技术检测脂肪细胞中GATA3、PPAR-γ、C/EBPα、β-catenin mRNA表达水平。(3)细胞过融合后,予成脂诱导液诱导成脂,A液3天,B液1天交替3次,共12天。诱导成脂后通过油红O染色判定细胞成脂情况。实验数据采用SPSS13.0软件进行统计学分析,以均数±标准差(x±s)的形式将研究所得结果进行表示,组间差异比较采用单因素方差分析,组间多重比较用LSD检验,检验水准取α=0.05。结果:(1)CCK-8细胞增殖实验:1mM、2mM、5mM具有促增殖作用,不同浓度间无明显差别;与1mM相比,10mM促增殖作用减弱。(2)油红O染色结果显示:与对照组对比,不同浓度的二甲双胍对脂肪细胞成脂均有一定的抑制作用,其中10mM抑制作用最强(图2-1)。(3)10mM二甲双胍较0、1、2mM相比,明显促进GATA3 mRNA的表达;10mM二甲双胍与5mM相比,明显下调PPAR-γmRNA的表达;与control相比,不同浓度二甲双胍均可明显抑制C/EBPα的表达,与5mM相比,10mM有抑制增强的趋势。(4)各浓度对β-catenin表达水平无显著差别(表2-1)。结论:在前脂肪细胞阶段给予二甲双胍,10mM二甲双胍可以明显抑制脂肪细胞的成脂分化,其机制可能与促进GATA3,抑制PPAR-γ和C/EBPα有关。近期研究表明,AICAR通过激活AMPK信号通路激活wnt经典通路,促进GATA3的表达从而抑制前脂肪细胞成脂。PPAR-γ和C/EBPα是脂肪细胞中调控脂肪细胞分化的关键转录分子。β-catenin是wnt经典通路的关键分子。本项目推测高浓度的Met可能激活AMPK途径,促进GATA3表达,抑制PPAR-γ和C/EBPα,但β-catenin无变化,可能与β-catenin非依赖性的非经典途径有关,具体分子机制有待进一步的蛋白水平及基因敲除等实验步骤的深入研究。