食管癌(esophageal cancer,EC)是威胁人类健康的重要疾病之一,在发展中国家的发病率较高,五年生存率较低,预后极差。目前虽然化疗在临床上应用非常广泛,但化疗耐受和副作用不断产生。多项研究表明,细胞自噬可能有利于肿瘤细胞的生存从而导致化疗药物耐药性的产生。因此,调节细胞自噬可能成为肿瘤治疗的有效方法之一。紫杉醇(Paxlitaxel,PTX)可作用于微管而终止细胞分裂,同时诱导细胞凋亡,因此被广泛应用于多种恶性肿瘤的临床治疗中,迄今为止虽取得令人较为满意的疗效,但是越来越多的研究发现紫杉醇可能诱导细胞自噬从而导致其疗效渐差,因此调节自噬可望增强常用化疗药物的抑癌作用。目的:探讨氯喹介导的细胞自噬在紫杉醇对食管癌细胞的化疗中的作用及其相关分子机理,为寻求潜在的化疗增敏剂提供实验室依据。方法:采用自噬抑制剂氯喹与紫杉醇单独及联合作用于食管癌细胞,观察其生长和增殖,迁移和侵袭能力的变化。1.利用CCK8检测氯喹,紫杉醇单独及联合处理食管癌EC109细胞后,对细胞生长和增殖的影响;2.细胞划痕实验及Transwell小室检测细胞迁移能力的改变;3.软琼脂糖实验检测细胞克隆形成能力的变化;4.免疫印迹检测PI3K/Akt/mTOR细胞信号通路中Akt,mTOR,p70S6K,4EBP1的磷酸化水平以及自噬相关蛋白LC3与p62的表达差异;5.转染外源性GFP-LC3质粒用于观察氯喹作用于EC109细胞前后LC3发生的转位改变,从而反映EC109细胞发生自噬的变化;6.采用shrna技术敲低mtor表达,阻断mtor信号通路观察ec109细胞的生长和增殖,迁移和侵袭能力的变化。结果:1.氯喹与紫杉醇均能有效抑制食管癌细胞ec109的生长和增殖,迁移及克隆形成能力,抑制作用呈时间和剂量依赖效应;两者联合处理后,抑制效应更加明显;2.westernblot结果显示氯喹与紫杉醇均能下调pi3k/akt/mtor通路中p-akt和p-mtor的表达,同时氯喹能降低p-p70s6k和p-4ebp1的表达,紫杉醇却上调p-p70s6k和p-4ebp1的表达,氯喹与紫杉醇联合处理后二者的表达均低于紫杉醇组,高于氯喹组;3.westernblot显示自噬相关蛋白lc3和p62,在氯喹处理后二者表达增加,紫杉醇处理后却无明显变化,两者联合使用后lc3和p62表达低于氯喹组,高于紫杉醇组;4.通过转染gfp-lc3报告质粒观察到氯喹能促进自噬体的形成,紫杉醇未引起明显自噬;两者联合处理后自噬体数量低于氯喹组,高于紫杉醇组;5.利用shrna降低mtor表达后,食管癌细胞的生长增殖速度减慢,细胞迁移和克隆形成能力减弱,对氯喹和紫杉醇的敏感性增加;6.mtor表达被抑制后,p-akt,p-p70s6k和p-4ebp1表达降低,lc3和p62表达增加。结论:1.氯喹与紫杉醇均可抑制食管癌ec109细胞的生长和增殖,减弱其迁移和克隆形成能力;2.氯喹介导的细胞自噬可增强紫杉醇对食管癌EC109细胞的生长抑制作用;3.氯喹与紫杉醇可能通过激活Akt/mTOR通路从而发挥抑癌作用;调控Akt/mTOR通路能够抑制食管癌EC109细胞的生长和增殖,减弱其迁移和克隆形成能力,提高氯喹和紫杉醇对EC109细胞的敏感性;4.氯喹可作为一种化疗增敏剂应用于临床,调节细胞自噬可能是食管癌治疗潜在的新思路和新靶向。