人B淋巴细胞活化相关新基因的克隆及鉴定

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B淋巴细胞是机体重要的免疫活性细胞,在机体免疫应答中,B细胞接收抗原或其它因素的刺激后,发生活化、增殖及分化,产生应答效应,并伴随有表面抗原及一些活化基因的表达变化。寻找B细胞活化相关的新基因是当前分子免疫学研究的热点之一。 本文首先采用差异显示反转录PCR技术(DDRT-PCR)对人扁桃体活化和静止B细胞mRNA的差异显示情况进行分析,共获得明显差异表达的cDNA片段62条,其中主要表达于静止B细胞的差示片段32条,主要表达于活化B细胞的差示片段30条。选择主要表达于活化B细胞上的20条cDNA片段克隆到pGEM-T载体上,并逐一对静止和活化B细胞RNA进行Northern杂交分析,其中7条cDNA片段在活化B细胞中呈Northern杂交阳性11与差异显示情况相符,对它们进行测序,然后通过国际互联网与GenBank、EMBL和DDBJ的DNA数据库比较序列同源性,发现其中四个克隆(XB11、YA1、ZD11和ZD12)与已发现的基因具明显同源性,两个克隆(XD11和ZE2)是新的。另一个克隆(ZE1)虽然与人T细胞分泌的趋化因子Ⅰ-309同源性达95%,但二者转录本不同。将上述序列送到GenBank的dbEST分部,都给予了序列编号。 为了获得B细胞活化相关新基因的全长,构建了活化B淋巴细胞的cDNA文库,原始文库容量为1.12×10~6。插入片段的平均长度约为1.2kb以上。以ZE2(AI374102)为探针筛选活化B细胞cDNA文库,获得6个阳性克隆,对其中最长的一个进行序列测定,其长度为2272hp,命名为HAB60,该序列与GenBank DNA数据库中的所有序列不具有显著同源性,为一新序列。GenBank收录号为AF123320。多组织膜Northern杂交显示,在人脾脏、胸腺、外周血、睾丸、卵巢、前列腺、小肠和结肠粘膜中均有表达,转录本均约为2.4kb,其中,在胸腺中的表达最弱;而对活化的扁桃体B细胞、活化B细胞系3D5和SKW-6细胞、T细胞系Jurkat细胞、髓系K562细胞的Northern杂交提示存在不同长度
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