H3N2亚型猪流感病毒分离鉴定及血凝素基因分子进化分析

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hnkfxwj
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猪流感(SI)是由猪流感病毒(SIV)引起的猪的一种急性、高度接触性呼吸道传染病。单纯感染SI时死亡率低,继发或混合感染其它病原体时,死亡率显著升高,给养猪业造成很大的经济损失,而且由于猪是禽和哺乳动物流感病毒的中间宿主和产生重组毒株的混合器,具有重要的公共卫生学意义,因此对SIV的研究已成为流感研究中的热点。 本研究从河北省某屠宰场随机采集猪鼻棉拭子,通过SPF鸡胚尿囊腔接种进行病毒分离,对分离获得的病毒进行形态学观察、血清学鉴定。结果透射电镜负染观察到典型的球状病毒粒子,直径为80nm左右;利用禽流感H5、H7、H9和猪流感H1、H3亚型特异性血清鉴定,确定分离株为H3N2亚型SIV,命名为A/Swine/Hebei/1/2005(H3N2),A/Swine/Hebei/24/2005(H3N2),A/Swine/Hebei/68/2005(H3N2),为SI的防制与监测打下前期工作基础。 本实验测定了A/Swine/Hebei/1/2005(H3N2)的理化特性及对SPF鸡和清洁级昆明鼠的致病性。该毒株对乙醚、氯仿、酸(pH3.0)敏感,血凝素为热稳定型。鸡胚半数感染量(EID50)、脑内接种致病指数(ICPI)和静脉接种致病指数(IVPI)这三个致病性指标测定结果分别为10-8.77/0.2ml,1.16/0.05ml,0.71/0.1ml,SPF鸡致病性试验结果为10天内死亡2只,结合禽流感致病性判断标准,判定该分离株对SPF鸡为低致病性。试验组SPF鸡眼观可见肺脏病变部呈暗红色;肝脏有少量出血点;肾脏呈“花斑肾”;肌胃和腺胃交界处有点状出血,镜下可见肺淤血、呼吸毛细管腔变小、间质水肿;肾脏淤血、肾小管上皮细胞变性、坏死;肝脏有红细胞聚集成团。A/Swine/Hebei/1/2005(H3N2)对清洁级昆明鼠为低致病性,试验组昆明鼠眼观只见肺部病变,镜下可见肺血管明显淤血,间质中有红细胞浸润;肾小管上皮细胞变性、坏死。昆明鼠的同居感染试验证明A/Swine/Hebei/1/2005(H3N2)可在昆明鼠间传播,为SIV在小鼠间传播的深入研究提供实验依据。 从接种A/Swine/Hebei/1/2005(H3N2)的SPF鸡胚尿囊液中提取病毒总RNA,设计血凝素(HA)基因特异性引物,RT-PCR扩增并测序。分析A/Swine/Hebei/1/2005(H3N2)HA1基因与从Genbank上选取的31株参考毒株HA1基因间的同源性,结果表明A/Swine/Hebei/1/2005(H3N2)与A/Swine/Guangdong/5/2003(H3N2)亲缘关系最近,核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.0%、97.2%,同源性分析为SI分子流行病学和遗传演化研究提供了理论依据。
其他文献
马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)属于反转录病毒科慢病毒属,是马传染性贫血(equine infectious anemia,EIA,简称马传贫)的病原体。我国的马传贫驴白细胞