卵泡抑素对牛颗粒细胞调控机制的研究

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通常认为,卵泡抑素(Follistatin, FST)作为一种活化素结合蛋白,参与调节哺乳动物卵泡发育,但其是否能通过自分泌作用直接调节颗粒细胞和卵泡的发育,尚无文献报道。为了研究卵泡抑素对黄牛颗粒细胞的调控作用,本研究构建卵泡抑素RNA干扰载体RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen,在mRNA和蛋白水平干扰牛颗粒细胞中卵泡抑素的表达,发现在干扰卵泡抑素表达后:(1)流式细胞仪检测黄牛颗粒细胞的周期发现,更多的细胞阻滞在G1期,控制细胞周期的p21基因蛋白表达量显著上调;(2)流式细胞仪检测颗粒细胞的凋亡发现,细胞早期和晚期凋亡都显著增加,通过RT-PCR和Western Blot分析凋亡相关基因的表达发现,Caspase-3和BAX的表达水平显著上调,而Bcl-2的表达水平则显著下调;(3)ELISA检测颗粒细胞分泌活化素、雌激素和孕激素浓度发现,活化素分泌显著上调,雌激素分泌量显著下降,而孕激素变化不显著;(4)通过RT-PCR检测转染后颗粒细胞中活化素受体及抑制素各亚基的mRNA水平,发现所有活化素受体(ACVR1.ACVR2A和ACVR2B)以及抑制素a亚基(INHA)的表达量都显著上调,而抑制素p亚基(INHBA和INHBB)的表达量没有明显变化。这些结果说明卵泡抑素是通过影响颗粒细胞中抑制素和活化素受体的活动,进而调控细胞周期和凋亡相关基因的表达从而调控细胞的周期并且抑制细胞的凋亡,进而影响细胞类固醇激素的分泌。因此,卵泡抑素对颗粒细胞具有直接调控的作用。
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