花青素对非小细胞肺癌GST-π表达的影响

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背景非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)是肿瘤中致死率较高的疾病,对人类的危害较大。对于中晚期与术后复发的NSCLC患者,目前尚缺乏有效的治疗手段,放、化疗作为主要的治疗方法,有着效率低、敏感性低和细胞毒性高等缺点。有研究表明,谷胱甘肽-S-转移酶π (glutathione-S-transferases π, GST-π)在多种肿瘤的组织中呈现高表达状态,并且与肿瘤的诊断、疗效有着密切关联。近年的研究发现植物提取物花青素(anthocyanidin)具有清除自由基、抗氧化、减少肿瘤细胞耐药等作用,并在多种恶性肿瘤的治疗中具有一定的作用,但对于NSCLC的影响与疗效方面的研究报道较少。目的探寻NSCLC的新的诊疗方法,研究花青素对于NSCLC细胞中GST-π表达的影响,明确花青素对于NSCLC细胞的作用机制,并筛选出花青素作用的最适浓度,为NSCLC治疗的基础研究和临床试验提供实验室依据。方法1取临床NSCLC标本,分离、培养NSCLC细胞:新鲜标本40例,20例鳞癌、20例腺癌,组织块法分离原代细胞,并培养至P2。2药敏试验:按花青素浓度分为0μg/ml组,10μg/ml组,10μg/ml组,500μg/ml组和1000μg/ml组,以0μg/ml组为对照组。MTT法筛选体外培养NSCLC细胞的培养基中所含的最适作用浓度花青素。3花青素对NSCLC细胞GST-π表达影响实验方法:以花青素浓度100μg/ml组为实验组,以0μg/ml组为对照组,细胞免疫组化法检测2组NSCLC细胞中GST-π的蛋白表达情况;细胞ELISA法检测2组NSCLC细胞中GST-π的蛋白含量;RT-PCR法检测2组NSCLC细胞中GST-π的mRNA的表达情况。结果①100μg/ml花青素对NSCLC细胞的抑制率达到了65%,高于其他三种花青素浓度,表明在本研究中含花青素培养基体外培养NSCLC细胞的最适作用花青素浓度是100μg/ml。②实验组NSCLC鳞癌和腺癌组织细胞GST-π的表达低于对照组,实验组鳞癌和腺癌GST-π的表达无差异,对照组鳞癌和腺癌GST-π的表达无差异。③实验组NSCLC鳞癌和腺癌组织中GST-π含量低于对照组鳞癌,实验组鳞癌和腺癌GST-π的含量无差异,对照组鳞癌和腺癌GST-π的含量无差异。④以GADPH为内参,经RT-PCR检测实验组NSCLC鳞癌和腺癌组织匀浆中GST-π mRNA水平与对照组相比下调,实验组NSCLC鳞癌和腺癌组织匀浆中GST-π mRNA水平相比无差异,对照组NSCLC鳞癌和腺癌组织匀浆中GST-π mRNA水平相比无差异。结论100μg/ml是本研究中花青素干预体外培养NSCLC细胞的最适作用浓度。花青素降低NSCLC细胞GST-π表达,有助临床选择有效化疗。
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