论文部分内容阅读
背景与目的内皮抑素(ES)作为最重要的血管生成抑制因子,已被广泛应用于抗肿瘤血管生成治疗。既往研究表明ES可抑制瘢痕增生,但目前尚未见局部外用ES对创面愈合影响及蛋白激酶C(PKC)-a是否介导其作用的研究报道。本实验探讨PKC-a在ES调控创面愈合及血管增生中的信号作用。材料与方法选用健康成年新西兰大耳白兔36只,雌雄不限,体重2.0-2.5kg。所有动物适应性饲养1周,3%戊巴比妥钠(1.0ml/kg)耳缘静脉麻醉后,分别在每只兔耳腹侧做4个直径为10.0mm,间距15.0mm的全层皮肤缺损创面。将36只大耳白兔随机分为6组：Rh-ES组、PMA组、Go6983组、Rh-ES+PMA组、Rh-ES+Go6983组和PBS对照组,每组48个创面,分别湿敷Rh-ES (10μg/ml)、 PMA (10nM)、Go6983(1nM)、Rh-ES+PMA (10μg/ml+10nM)、Rh-ES+Go6983(10μg/ml+1nM)和等量的PBS液。于伤后3d、7d、11d和上皮化(12d-16d)时观察创面愈合情况,记录创面愈合时间和创面愈合率,并切取创面标本行免疫组化染色检测CD34、PKC-a表达并计算微血管密度(MVD)。所有数据用均数±标准差(x±s)表示。采用SPSS17.0软件包进行统计处理：方差齐性时多组间均数比较采用方差分析,组间两两比较采用LSD法；方差不齐时采用Kruskal-Wallis检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果1.创面愈合时间：各组间创面愈合时间存在显著差异(F=9.241,P=0.000)。Rh-ES组、Go6983组、Rh-ES+G66983组愈合时间分别为(14.33±1.15)d、(14.58±1.24)d、(15.08±1.08)d,较对照组(13.36±1.21)d延长(P<0.05),而PMA组愈合时间(12.36±0.67)d缩短(P＜0.05), Rh-ES+PMA组(13.45±1.13)d与对照组相似(P＞0.05)。Rh-ES+Go6983组愈合时间较Rh-ES组延长(P<0.05),而Rh-ES+PMA组缩短(P<0.05)。2.创面愈合率：伤后第3d, Rh-ES+Go6983组创面愈合率低于PMA组和对照组(P<0.05),其余各组间创面愈合率无差异(P>0.05)。伤后第7d和第11d,Rh-ES组、Go6983组、Rh-ES+Go6983组创面愈合率低于对照组(P<0.05),但两两之间无差异(P>0.05)；PMA组创面愈合率较其余各组增加(P<0.05)。Rh-ES+PMA组各时间点创面愈合率与对照组相似(P>0.05)。3.MVD：伤后第3d, Rh-ES+Go6983组MVD低于对照组(P<0.05),其余各组与对照组相似(P>0.05)。自伤后第7d起Rh-ES组和Go6983组MVD低于对照组(P<0.05)而PMA组高于对照组(P<0.05),Rh-ES+PMA组MVD高于Rh-ES组、Go6983组和Rh-ES+Go6983组(P<0.05),但与对照组无差异(P>0.05),Rh-ES+Go6983组MVD低于对照组(P<0.05)。4. PKC-α表达：Rh-ES组各时间点PKC-a表达与对照组无差异(P>0.05)。自伤后第7d起PMA组和Rh-ES+PMA组PKC-a表达均高于其余各组(P<0.05),而Go6983组和Rh-ES+Go6983组PKC-a表达均低于其余各组(P<0.05),但PMA组和Rh-ES+PMA组、Go6983组和Rh-ES+Go6983组组间无差异(P>0.05)。结论1.内皮抑素可显著降低肉芽组织微血管密度,并延迟创面愈合。2.PKC-a可能不介导内皮抑素处理创面抑制血管增生的作用。3.PKC活化剂(PMA)促进创面愈合,PKC抑制剂(G66983)延迟创面愈合。