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根作为植物的主要器官之一,其作用主要包括固定和吸收无机营养物质等。植物根的生长发育主要依赖于根尖分生组织(Root apical meristem,RAM)。RAM主要由一些未分化的干细胞组成,干细胞的分裂和分化对于维持分生组织的形态建成和生理功能有着重要的作用。 细胞分裂素(cytokinin,CK)是一类主要的内源植物激素,研究表明,其可以通过控制细胞分裂调控RAM的形态建成;同时,细胞分裂素也可以通过与生长素之间的互作影响着这一进程。但细胞分裂素和根生长发育的具体调控机制仍未清晰。 AtABCG14作为细胞分裂素的转运蛋白,在根部合成的tZ类细胞分裂素的向顶长距离运输中发挥着重要作用。当植物缺失AtABCG14时,根中的tZ类细胞分裂素会过度积累,导致突变体出现短根表型。针对这一表型,通过分子生物学、遗传学、细胞学以及转录组分析等试验方法去解析细胞分裂素对根部生长发育的影响及其分子机理。获得的实验结果如下: (1)atabcg14突变体较野生型植株相比,根部表现出明显的细胞分裂素的积累,说明atabcg14突变影响了细胞分裂素的长距离运输。 (2)atabcg14突变体的根部明显缩短,证明过量的细胞分裂素抑制根的生长发育。 (3)GUS染色表明CYCB1;1∷GUS在atabcg14突变体中的表达量与在野生型植物中比较明显降低,与用6-BA外源处理CYCB1;1∷GUS/WT相一致。此外,atabcg14突变体的RAM的细胞数目明显减少,证明细胞分裂素影响了RAM的细胞数目,进而影响RAM的分裂活性。 (4)在atabcg14突变体中,生长素相关基因DR5驱动的GUS基因表达量与野生型相比同样明显降低;同时,生长素运输相关基因的GFP荧光强度出现变化,显示为PIN1,PIN2的信号明显下调,PIN7的信号明显上调。证明细胞分裂素能够影响生长素在根中的运输,从而影响生长素在RAM的分布。 (5)RNA-seq结果分析表明,atabcg14突变体中生长素氧化相关基因DAO2的表达量明显上调,后期qPCR的结果对该结果进行了确认。说明细胞分裂素能够激活DAO2的表达,促进生长素的氧化过程。 同时,有研究证明AtABCG14是细胞分裂素长距离运输中的关键组件,但是关于AtABCG14基因的转录调控机制的研究尚未清晰。因此,对AtABCG14的启动子进行研究,同时尝试筛选能够调控AtABCG14在不同组织表达的转录因子。获得的实验结果如下: (1)当截短AtABCG14的启动子时,其驱动GUS基因表达部位发生了明显变化。同时,当在atabcg14突变体中转入不同长度启动子驱动的AtABCG14进行回复实验时,发现atabcg14突变体的回复情况各不相同,证明在AtABCG14的启动子中含有关键作用元件调控其在不同组织中表达。 (2)通过酵母单杂交和荧光双分子分析,筛选到7个候选转录因子。