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目的研究磷酸钙骨水泥(Calcium phosphate cement, CPC)及磷酸钙骨水泥/聚乳酸羟基乙酸(Calcium phosphate cement/polylactic acid-polyglycolic acid, CPC/PLGA)复合物凝固初期的降解规律,探讨其凝固初期对单核巨噬细胞RAW264.7细胞增殖的影响及破骨细胞相关因子RANK表达的作用,从而为进一步阐明PLGA促进CPC降解的机制提供依据。方法实验一、CPC/PLGA凝固初期对RAW264.7细胞增殖作用的影响及钙磷离子变化1、CPC/PLGA凝固初期对RAW264.7细胞增殖作用的影响实验分组为对照组(RAW264.7细胞)、CPC组(CPC+RAW264.7细胞)、CPC/PLGA组(CPC/PLGA+RAW264.7细胞)。将CPC/PLGA初凝块按分组与RAW264.7细胞共培养。利用四唑盐比色试验(MTT)检测第1、3、5、7、9天时,各组的吸光度值,并绘制生长曲线,计算相对增殖率。探讨CPC及CPC/PLGA复合物凝固初期对单核巨噬细胞RAW264.7细胞增殖的影响。2、CPC/PLGA复合物凝固初期PH值及钙磷离子浓度变化该实验分为无细胞组及细胞组,两组均包含空白对照组、CPC组以及CPC/PLGA组。将调拌好的CPC 及 CPC/PLGA浆料填入模具,并按照分组放入孔板,加入5mlDMEM完全培养基,在37℃,5%C02环境中浸提7天,每天换液。在第1、3、5、7d时收集浸提液,检测其PH值。根据PH值检测结果,选择细胞共培养组浸提液,利用全谱直读型电感耦合等离子发射光谱仪(ICP-OES)检测其中钙离子以及磷离子的含量,探讨CPC/PLGA凝固初期PH值及钙磷离子浓度的变化。实验二、CPC/PLGA凝固初期对RAW264.7破骨细胞相关因子RANK的影响实验分组：对照组(RAW264.7细胞)、CPC组(CPC+RAW264.7细胞)、CPC/PLGA组(CPC/PLGA+RAW264.7细胞)。将RAW264.7与调拌好的CPC以及CPC/PLGA共培养7天,收集细胞,提取RNA,通过RT-PCR检测细胞中RANK(Receptor activator of nuclear factor kappaB)的表达；并通过免疫荧光检测细胞中RANK的表达,探讨CPC/PLGA凝固初期对单核巨噬细胞RAW264.7细胞破骨细胞相关因子RANK的作用,为进一步阐明PLGA促进CPC降解的机制提供依据。结果实验一、CPC/PLGA凝固初期对RAW264.7细胞增殖作用的影响及钙磷离子变化1、CPC及CPC/PLGA凝固初期对RAW264.7细胞增殖作用的影响MTT实验结果显示,RAW264.7细胞在第三天时即达对数生长期,第七天达到生长高峰, CPC组和PLGA组第一天时相对增殖率分别为79.43%和66.67%,随后,两组细胞相对增殖率逐渐升高,CPC组在第9天达到最高值97.83%,CPC/PLGA组在第7天达到最高值94.03%。2、CPC/PLGA复合物凝固初期PH值及钙磷离子浓度变化在无细胞培养浸提液中,各组PH值呈现为：对照组>CPC/PLGA组>CPC组。在7天的无细胞培养浸提时间中,浸提液PH值呈现出上下波动的状态。在与细胞共培养浸提液中,各组PH值呈现为随培养时间逐渐降低的趋势。材料与细胞共培养的浸提液钙离子浓度变化的结果显示,对照组中的钙离子在1d、3d、5d、7d时,均显著高于CPC组与CPC/PL GA组(P<0.05)。材料与细胞共培养浸提液磷离子浓度结果显示,CPC组磷离子浓度在1d、3d、5d、7d最高,均显著高于对照组与CPC/PLGA组(P<O.05),最高浓度为(0.49±0.08)mmol/L。实验二、CPC/PLGA凝固初期对RAW264.7破骨细胞相关因子RANK表达的影响CPC及CPC/PLGA对RAW264.7细胞RANK基因表达的影响：在1d、3d、5d、7d时间点中,CPC组细胞RANK基因的表达与对照组细胞无明显差异。而CPC/PLGA组细胞在6h、5d时,RANK表达量相对于对照组有显著增高(P<0.05),最高值出现在6h时,其RANK基因表达扩增倍数达到95.35±29.43。免疫荧光检测RAW264.7细胞RANK蛋白的表达情况：在6h、3d、5d、7d时,RANK在CPC组及CPC/PLGA组平均荧光密度值均高于对照组(P<0.05)。结论1、CPC以及CPC/PLGA凝固初期浸提液对RAW264.7细胞增殖无明显抑制作用。无细胞以及细胞共培养的CPC和CPC/PLGA浸提液PH变化表现出不同的规律,提示RAW264.7细胞可能影响CPC/PLGA浸提液中PH值。在细胞共培养浸提液中,钙磷离子释放规律不同,提示RAW264.7细胞分别对钙磷离子有不同的作用方式。2、CPC/PLGA浸提液能够促进RAW264.7细胞的RANK因子表达上调。